水流动力学注射介导的白细胞介素-12基因在小鼠体内的高效表达
发布时间：2019-09-10 15:21
【摘要】： 非病毒载体制备简便、应用安全,但转染效率低限制了其应用。为了克服此缺点,本实验采用水流动力学注射方法,将表达小鼠白细胞介素-12(IL-12)的质粒pCMV-mIL-12通过尾静脉快速注入小鼠体内,于不同时间点取血及主要器官,应用ELISA、PCR、RT-PCR及免疫组织化学等方法,揭示质粒在各组织器官的分布及表达;测试质粒重复注射的有效性;评估水流动力学注射对小鼠的损伤及修复情况。 结果显示,水流动力学注射质粒后4小时即可在血清中检测到mIL-12的表达,10小时达高峰,3天迅速下降,第7天恢复到基线值,并且随着质粒剂量的增加,mIL-12的表达也增加,表达出的mIL-12可成功地诱导IFN-γ及NO的产生;质粒在注射后10小时及24小时分布于小鼠的肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等器官,第3天则仅存在于肝脏内;应用此方法重复注射质粒可获得相似水平的mIL-12表达及NO的产生,但IFN-γ的产生却明显减少;水流动力学注射会引起小鼠肝脏早期出现灶状出血坏死,此损伤可在1-2周内迅速恢复,不会引起肝脏的纤维化。 因此,水流动力学注射能够实现pCMV-mIL-12质粒在小鼠体内的高效表达及重复注射,是一种新型、简单、安全、有效的体内基因转移技术。
【图文】：
mIL-12 质粒在体外培养的肿瘤细胞中的表达 expression after transfection of cultured cells with pCMand Smmc-7721 cells were transfected with pCMV-mIn, the supernatant was collected for determination of ml cells were not transfected. Data are presented as mean ±-12、IFN-γ 及 NO 的动力学表达及质粒 DNA 剂水流动力学注射后质粒的动力学表达情况，我pCMV-mIL-12 的盐水溶液，然后于不同时间点测血清中 mIL-12 的含量。结果如图 3A 所示，测到 mIL-12（2111±1028ng/ml），10 小时达约为 4 小时的 9.4 倍，24 小时仅下降了 5%，但mIL-12 水平仅为 112±97ng/ml，与 10 小时比有 0.48±0.43ng/ml，第 7 天时恢复到基线值质粒 DNA 剂量对 mIL-12 表达的影响，，我们经
16图 2. pCMVβ质粒在体外培养的肿瘤细胞中的表达Fig 2. LacZ expression after transfection of cultured cells with pCMVβ.The cells were transfected with pCMVβ. Forty eight h after transfection, the cells werestained with X-gal staining solution to determine of LacZ expression (D, E, F). Nontransfected cells were used as a control (A, B, C). A and D: Hela cells; B and E: Smmc-7721cells; C and D: MCF-7 cells. Original magnification ×400发现，尽管注射质粒 DNA 的剂量不同，但 mIL-12 的动力学表达趋势却很一致，即注射后 4 小时可检测到，10 小时达高峰，72 小时迅速下降，第 7 天除 16μg 组略高于基线值外（图未显示），其余各组均回复到基线值。因为无论注射哪个剂量，mIL-12 的表达均在 10 小时达到最高水平，因此我们仅比较了不同剂量质粒注射后 10 小时血清中 mIL-12 的浓度。如图 3B 所示，在
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392
本文编号：2534102
【图文】：
mIL-12 质粒在体外培养的肿瘤细胞中的表达 expression after transfection of cultured cells with pCMand Smmc-7721 cells were transfected with pCMV-mIn, the supernatant was collected for determination of ml cells were not transfected. Data are presented as mean ±-12、IFN-γ 及 NO 的动力学表达及质粒 DNA 剂水流动力学注射后质粒的动力学表达情况，我pCMV-mIL-12 的盐水溶液，然后于不同时间点测血清中 mIL-12 的含量。结果如图 3A 所示，测到 mIL-12（2111±1028ng/ml），10 小时达约为 4 小时的 9.4 倍，24 小时仅下降了 5%，但mIL-12 水平仅为 112±97ng/ml，与 10 小时比有 0.48±0.43ng/ml，第 7 天时恢复到基线值质粒 DNA 剂量对 mIL-12 表达的影响，，我们经
16图 2. pCMVβ质粒在体外培养的肿瘤细胞中的表达Fig 2. LacZ expression after transfection of cultured cells with pCMVβ.The cells were transfected with pCMVβ. Forty eight h after transfection, the cells werestained with X-gal staining solution to determine of LacZ expression (D, E, F). Nontransfected cells were used as a control (A, B, C). A and D: Hela cells; B and E: Smmc-7721cells; C and D: MCF-7 cells. Original magnification ×400发现，尽管注射质粒 DNA 的剂量不同，但 mIL-12 的动力学表达趋势却很一致，即注射后 4 小时可检测到，10 小时达高峰，72 小时迅速下降，第 7 天除 16μg 组略高于基线值外（图未显示），其余各组均回复到基线值。因为无论注射哪个剂量，mIL-12 的表达均在 10 小时达到最高水平，因此我们仅比较了不同剂量质粒注射后 10 小时血清中 mIL-12 的浓度。如图 3B 所示，在
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 颜伏归,段芳龄;肝脏干细胞调控机制的研究进展[J];胃肠病学和肝病学杂志;2003年01期
2 李艳茹;张海英;李晓敏;李玉林;王琳;;水流动力学注射方法对小鼠肝脏的毒性[J];中国实验诊断学;2006年04期
本文编号：2534102
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