原子力显微镜对正常细胞、肿瘤细胞及加热后细胞的细胞膜表面形态结构观察

发布时间：2019-09-21 18:32

【摘要】：目的 寻找AFM观察培养细胞获得理想图像的样本制备方法;运用AFM探寻正常细胞膜与肿瘤细胞膜表面结构的异同:改变培养细胞的温度和时间,观察纳米级水平下加热引起细胞膜结构的变化,进而探讨热疗对细胞的影响及意义。 材料与方法 采用人成纤维细胞(Fb cell)、人宫颈癌细胞(Hela cell)、人乳腺癌细胞(Mcf7 cell)、恶变的人成纤维细胞细胞(Ma-Fb),DMEM+10%(v/v)热灭活的胎牛血清培养基(PH=7.2～7.3,滤过消毒),0.25%胰蛋白酶(1:250,PH=8),甲醛溶液,枸橼酸盐缓冲液,5%葡萄糖溶液。摸索AFM标本制备方法:将培养好的细胞用2%甲醛溶液固定,置于较洁净空间晾干,或直接用5%葡萄糖溶液或枸橼酸盐缓冲液冲洗3遍,置于较洁净空间晾干。常规培养细胞标本的制备:将细胞接种于置有盖玻片的培养皿中,当细胞长满培养皿底部的80%时,取出细胞爬片,用2%(v/v)福尔马林溶液冲洗、固定后,用双面胶贴于载玻片上,置于较洁净空间晾干。加热标本的制备:如上接种并培养细胞,细胞长好后,同时置于本实验设定的不同温度的隔水式恒温箱中,加热不同时间后取出,吹打细胞成细胞悬液,用2%福尔马林溶液稀释后,1000rpm,5min离心3遍,制成细胞涂片,放入较洁净空间晾干。 利用AFM对晾干的标本进行扫描,采用Tapping模式,对每个样本扫描6个细胞,每个细胞扫描4个区域,扫描范围:80μm～500nm,扫描速率:0.5Hz～2Hz。 结果 2%甲醛溶液固定标本和枸橼酸盐缓冲液冲洗标本的细胞膜表面都很干净,5%葡萄糖溶液冲洗后标本图像模糊成片,不能反应出细胞膜结构。正常Fb细胞膜由较规则的突起与凹陷构成,突起形状较规则,大
【图文】：

一:扫描范围为500nm时，，2%甲醛溶液固定标本

一:扫描范围为500.田时，构楷酸盐缓冲液冲洗标本
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R329;R361

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本文编号：2539492