Agrin和Dystroglycan在淋巴细胞活化中的作用及其机制研究

发布时间：2019-09-21 19:31

【摘要】：T淋巴细胞引起的获得性免疫应答在感染免疫、肿瘤免疫、自身免疫性疾病、移植排斥反应等中发挥着极其重要的作用。近几十年来,在T淋巴细胞的活化及T细胞和APC细胞的相互识别等研究中取得了长足的进展。尤其是近十年来随着免疫学家对免疫突触的认识和研究的深入,参与淋巴细胞活化的分子和机理得到了较为深入的阐明。免疫突触(synapse)的形成是免疫细胞间分子的相互识别和信号得以传递的先决条件,而免疫突触的形成完全依赖于免疫细胞表面的TCR、MHC、CD_3等膜表面分子的集聚和相互识别。但是这些相互识别的膜分子是如何由疏散状态变成成簇状态以致能紧密结合使信号转导得以实现并最终发生免疫应答,至今尚未完全清楚。Agrin是一种在神经突触中发挥重要作用的基质蛋白。已证实,Agrin与突触后膜相应受体Dystroglycan结合后可使乙酰胆碱受体发生集聚和重排并使膜结构稳定,从而促进神经突触的发育和形成。免疫突触与神经突触在形成过程中都需要表面分子的集聚并形成帽化样的结构。鉴于Agrin及其受体Dystroglycan在神经突触中的重要作用及其与免疫突触形成的某些相似性,因而有理由推测Agrin及其受体在免疫突触中可能同样扮演着重要角色。据此本研究对Agrin和Dystroglycan在免疫系统的分布和表达、在淋巴细胞活化中的作用、以及其对发育成熟前后的淋巴细胞活化影响的作用机制进行了研究。第一部分 Agrin和Dystroglycan在淋巴细胞中的表达一、不同免疫器官中Agrin和Dystroglycan的分布为研究Agrin和Dystroglycan在免疫系统的表达和分布,首先用RT—PCR检测发现在小鼠的脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结中均有Agrin和Dystroglycan的表达,应用免疫荧光进一步从蛋白水平检测发现:Agrin和Dystroglycan广泛分布在脾脏、胸腺、肠系膜等免疫器官或组织中的各种细胞中。此结果提示,Agrin和Dystroglycan可能在不同的免疫细胞中均有表达。二、不同免疫细胞中Agrin和Dystroglycan的表达
【图文】：

淋巴结组织,胸腺,和分布

图1.1Agrin在脾、胸腺、淋巴结组织中的表达和分布Fig1.1AgrinexPressioninimmuneorgansA).AgrinmRNAexPerssioninsPleen(l)，thymus(2)，mesenterielymPhnode(3)detectedbyR下PCR:B).AgrinPorteinexPressioninsPleen，thymusandmesenterielymPhnode.Abl:antibodyagainstagrin(mouseIgG)，AbZ:FITC一labledgoatanti一mouseIg.G

淋巴组织,胸腺,肠系膜,分布和

图1.2Dysrtogylcan在脾、胸腺、肠系膜淋巴组织中的分布和表达Figl.2DystrogylcanexPressioninimmuneorgansA).DystroglyeanmRNAexPressioninsPleen(l)，thymus(2)，mesenierielymPhnode(3)deteetedbyR下PCR:B).DystroglyeanProteinexPressioninsPleen，thymusandmesentericlymPhnode.Abl:natibodyagainstdystroglyean(mouseIgM)，AbZ:灿odamine一labledgoatanti一mouseIgM二、Agrni和Dystorgylacn广泛表达在不同免疫细胞中脾脏、胸腺、淋巴结是由多种不同的细胞组成的混合体，通常包括T细胞、B细胞、树突状细胞和M中等，为进一步阐明是何种免疫细胞表达Agrin和Dysrtoglycna，应用免疫磁珠从脾细胞中分选T，B细胞后应用流式细胞术分析T、B细胞纯度;T细胞纯度为97.77%(图1.3)。B细胞纯度为95.46%(图1.3)。树突状细胞和腹腔巨噬细胞的体外培养经过形态学检测均可见典型的DC形态和巨噬细胞的形态(如图1.4，，1.5)。将上述各种细胞提取RNA经逆转录，用特PCRDC、DC、T、B
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

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