热休克蛋白—抗原肽复合物激活的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的研究

发布时间：2019-09-22 02:20

【摘要】：开发更有效的抗肿瘤疫苗一直是肿瘤免疫治疗的主要目标之一。我们研究组以往的研究表明：经榄香烯处理的肿瘤细胞用做肿瘤疫苗免疫小鼠后，可诱导机体产生比较强的抗肿瘤免疫保护效应；用从榄香烯复合瘤苗(elemene combo tumor cell vaccine，EC-TCV)中提取的热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)HSP70_肽复合物进行免疫，可诱导比较强的特异性抗瘤免疫保护效应。这些结果提示，HSP70_肽复合物在榄香烯复合瘤苗诱导的抗瘤免疫保护效应中起十分重要的作用。 日益增多的证据表明，树突状细胞(dendritic cells，DCs)是功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APC)，在体内外均可激活初始型T细胞产生适应性免疫应答。HSPs是可以激活DCs的内源性分子，，它强有力地结合整个细胞内的抗原肽的能力，使它成为肿瘤疫苗最有吸引力的载体。本论文在上述研究基础上，选择Hca-F和L_(929)细胞系为模型，在体外比较卡介苗来源的HSP70_肽复合物(HSP70__(BCG))和Hca-F榄香烯复合瘤苗来源的HSP70_肽复合物(HSP70-_(EC-TCV))冲激的DCs抗Hca-F和L_(929)效应；探讨Toll-like Receptor 4(TLR_4)信号通路在HSP70__(BCG)和HSP70-_(EC-TCV)激活DCs过程中的作用；体外构建的Hca-F榄香烯复合瘤苗抗原肽-HSP70__(BCG)复合物(H_(TA)-HSP70__(BCG))激活的DCs的体内外抗瘤效应，主要结果如下： 一．HSP70__(BCG)和HSP70-_(EC-TCV)抗原肽复合物对DCs的冲激作用 1．HSP70__(BCG)和HSP70-_(EC-TCV)由本室从Hca-F榄香烯复合瘤苗细胞和BCG中提取，Western blot证实，全过程以低压液相色谱监控。 2．骨髓来源的不成熟DC通过在培养基中加入GM-CSF(20ng／ml)和IL-4(20ng／ml)培养5天获得。 3．以HSP70__(BCG)(25μg／ml)和HSP70-_(EC-TCV)(25μg／ml)冲激DC 24h，用ELISA法检测上清中IL-12浓度，用流式细胞仪检测DC表面CD_(86)和CD_(40)的表达。
【图文】：

LI说明书操作，用ELSIA试剂盒测标准品各浓度的D0值，以D0值为品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据标本样品的D0值可在标准度。9统计学处理验数据均用(r士S)表示，采用SPSSI1.5软件处理，进行t检结果DC的体外诱导一CSF可刺激DC前体细胞分化为DC，而Jll一4则可防止前体细胞化〔“，”〕。小鼠的骨髓细胞在GM一CSF、IL一4存在时，在培养的前3胞死亡，进一步培养可见细胞形态发生改变，细胞不规则，并有伪在扫描电镜下细胞表面有很多皱褶，细胞胞体不规则，表面粗糙，DC由于没有捕获抗原，属于不成熟DC。

图2.扫描电镜下观察到的DC的形态(x6000)Fig2.MoprhologyofDCobsevredbyeleeortn而eorseoPy(X6000)Sp70一Bee和HSP70一Ee一兀v冲激后nC表型的变化DC表面高表达CD86，CD40等，而不成熟DC这些分子是低表0一Beo和HSp7o一Ee一Tev冲激后，其表面Cns6，Cn4o的表达，见图两组DC表达CDs6，CD4o均呈显著升高(P<0.05)。、、伏:丸，，尹沪··彩彩彩众众{{{叮洲洲洲SN00闪O汾O。一不O价SFLI书
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：2539690