双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的损伤作用

发布时间：2019-09-22 03:45

【摘要】：目的：探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的损伤作用。方法：用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体，绘制虫体生长曲线；设立实验组(DHA组)、阳性对照组(MTZ组)和正常对照组(C组)。实验组和阳性对照组分别用含不同浓度的双氢青蒿素和甲硝唑的培养基培养；对照组的培养基不含药。用光学显微镜观察药物作用后虫体的活力、形态变化；测算虫体的死亡率和测定药物的半数致死浓度(medial lethal concentration，LC_(50))；对上述相关数据用SPSS统计软件分析比较；用透射电镜观察药物作用后不同时间滋养体的超微结构变化；以荧光染料罗丹明-鬼笔环肽(rhodanmine phalloidin，RDP)标记微丝，紫杉醇(Paclitaxel，Oregen Green 488，P22310)标记微管，用流式细胞术(flowcytometry，FCM)和激光共聚焦显微镜(confocal microscopy，CFM)检测、观察滋养体微丝和微管的变化；用碘化丙啶(propidium iodide，PI)标记虫体的DNA，并以流式细胞仪检测各组虫体细胞周期的变化；收集实验组和对照组虫体，分别扩增贾第虫磷酸丙糖异构酶(tim)基因、拓扑异构酶(TopoⅡ)基因、核纤层(lamin)基因和β-贾第素(β-giardin)基因片段，分析比较药物作用前后各基因片段序列的变化；提取虫体总蛋白，用Bradford法进行蛋白质定量测定，样本经蛋白质2D—电泳和硝酸银染色后扫描检测蛋白点的数量和种类，初步分析药物作用后蛋白质的变化。结果：光学显微镜观察结果显示，经双氢青蒿素作用后，贴壁生长的虫体从培养管壁脱落、变形、肿胀、表面出现空泡；失去正常的“瓢形”运动，，鞭毛摆动迟缓或停止。虫体死亡率随着药物作用时间延长和浓度的增加而增高(P＜0.001)。在同一作用时间内，随着药物浓度的增高，虫体死亡率也随之升高，即当双氢青蒿素作用24h，药物浓度为100μg／ml时，死亡率为48.68％，而当药物浓度增高至
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R285;R382

【引证文献】