IL-2与SDF-1α协同激活Syk激酶信号途径诱导Th1极化

发布时间：2019-10-22 23:49

【摘要】：目的:通过探讨IL-2和基质细胞源因了(SDF)-1α/CXCL12协同刺激下,Naive Th细胞Th1型、Th2型细胞因子的表达以及信号转导通路中关键分子的活化情况,判断协同刺激诱导的Th细胞极化方向,以及其信号转导通路可能的分子机制。 方法:使用流式细胞术和RT-PCR检测IL-2和SDF-1α/CXCL12协同刺激的脐带血(CB) CD4~+T细胞中胞内Th1型/Th2型细胞因子的mRNA和蛋白两个水平的表达情况;利用免疫复合物激酶分析法和免疫印记法,检测协同诱导Th1极化过程中Syk激酶和ZAP-70激酶的磷酸化情况以及Cb1家族和NFAT家族活化的情况;使用Syk PNA技术阻断Syk的表达,探讨Syk激酶在协同刺激后Th细胞极化过程中的重要意义;使用EMSA技术进一步探讨NFAT转录因子家族成员的活化情况,明确参与细胞因子转录的关键转录因子。 结果:流式检测结果:用IL-2和SDF-1α/CXCL12刺激8天,CB CD4+T细胞(Naive Th)转换成Th1细胞模式(84%IFN-γ阳性);RT-PCR检测结果:新鲜分离的CBCD4~+ T细胞中的IFN-γ或者IL-4 mRNA大约7.3×10~2或者2.1×10~3拷贝;相应的,用IL-2+SDF-1α刺激的细胞中的IFN-γ mRNA1.0×10~4拷贝,IL-4 mRNA大约有3.6×10~2拷贝;免疫复合物激酶分析法和免疫印记检测结果:IL-2和SDF-1α/CXCL12协同刺激的8天内,Syk激酶和Cb1-b蛋白发生显著而稳定的磷酸
【图文】：

/0sl拷贝，而用IL一2+sDF一la刺激的细胞中的FIN一YmNRA1.0/1扩，IL一4mNRA大约有3.6\102拷贝(见图2和3。其中△Rn:正常化报告中基因信号与开始几次PCR循环中得到的基线信号时之差;CT:域值周期，为我们第一次检测到位于基线之上的报告基因的荧光信号时的PCR循环周期。)。图2，实时定量R-TpcR检测细胞因子FIN一丫m洲A的表达情况红色曲线:标准DNA模板(p一actniZ，o\1了拷贝，c丁:17.5);黑色曲线:静息cBcD+4T细胞C(T:23.5);蓝色曲线:IL一2(longm/)l和sDF一la(100ngm/)l协同刺激细胞C(::18.9)。Figucr2.TherealtimequnatitativeR-TPCRofrcytokineIFN一YmR…NAdeteetion.29

实时定量RT‘PCR检测细胞因子IL一4mRNJ八的表达情况色曲线:标准DNz气模板(p一actni2.0/1扩拷贝，，cT17.5);黑色曲线:静息cBcDC(T:21.7);蓝色曲线:.1I一2(10ngm/1)和SDF一la(100ng/m)l协同刺激细胞C(丁:24.)果，均同样重复四次。u此3.TheeraltimequanlitatvieR-TPCRofrcytokineLI一4mR卜Adetecti。几:stnadardDNAtemplaet(p一aetin2.0X204eopiescT:17口5):black::estingeBcD4+Tc7):blue:theeejlsstimu]atedwithIL一2andSDF一l仪/CXCL12(CT:24.7):resPeetivel多ThtsarerePresentativesofofursimilareXPerimentsperofmred.2IL一2和sDF一1。/cxcL12协同诱导syk激酶的磷酸化情况2.1免疫复合物激酶分析Syk激酶磷酸化情况，sDs一GE，s，:一32P，
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392

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本文编号：2551837