SjFer与GM-CSF融合表达载体的构建及其诱导小鼠免疫保护力的研究

发布时间：2019-10-29 03:19

【摘要】： 日本血吸虫病是一种分布很广的、严重危害人畜健康的人畜共患寄生虫病。日本血吸虫疫苗是血吸虫病防治研究的重要领域，经过几十年的研究已取得了一定的成绩，但是现有疫苗候选分子诱导的免疫保护力均较低，有必要探讨如何提高现有疫苗候选分子的免疫效果。佐剂是提高核酸疫苗免疫保护力的重要途径，因此，本研究构建SjFer与粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)融合表达载体，以探讨GM-CSF对核酸疫苗pcDNA3.0/SjFer免疫保护力的影响。 根据GenBank中的SjFer基因序列设计特异性引物一对，以日本血吸虫cDNA文库为模板PCR扩增SjFer基因，常规方法构建pcDNA3.0/SjFer、pcDNA3.0/GM-CSF及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF。以雌性昆明小鼠为实验动物，85只，随机分5组，每组17只，分别接种生理盐水(A组)、pcDNA3.0(B组)、pcDNA3.0/GM-CSF(C组)、pcDNA3.0/SjFer(D组)及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF(E组)。于0，2，4周通过左后肢股四头肌每只每次注射纯化质粒50μg(生理盐水为50μl)。每次免疫前和感染前采血收集血清，ELISA检测血清内特异性IgG水平。末次免疫后2周每组随机宰杀5只小鼠无菌取脾，MTT法检测淋巴细胞增殖情况，并取左后肢股四头肌作免疫组化以检查重组质粒在小鼠肌细胞内的表达情况。末次免疫后两周每只小鼠经腹部感染40±1条尾蚴，45天后宰杀冲虫，计算减虫率和减卵率。结果显示：pcDNA3.0／GM-CSF、pcDNA3.0／SjFer及pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF能在小鼠肌细胞内的表达，D组和E组可诱导小鼠IgG抗体水平升高，，且E组IgG抗体水平高于D组。攻击感染前的淋巴细胞转化试验结果显示，D组和E组的脾淋巴细胞的转化率明显增加，与对照组差异显著，且E组的OD_(570)值明显高于D组。pcDNA3.0／SjFer和pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF诱导小鼠分别产生36.27％和39.22％的减虫率、36.10％和49.04％的减卵率。可见，GM-CSF可增强体液和细胞免疫应答并显著增强pcDNA3.0／SjFer的免疫保护力。
【图文】：

peDNA3.o/SjFe:的鉴定0DNA分子量对照;MZ，Marker111DNA分子量对照r经B溯Hl、肠01双酶切结果;2，重组质粒pcDN:的PCR产物icationofreeombinantPlasmidPcDNA3.0/sj’FerMarker;MZ，DNAMarker111:l，PeDNA3.O/SjFerdegiste2，reeombinantPlasmidPeDNA3‘0/Sj石’er:3，pCr绷﨏枷期彻峥

重组质 粒peDNA3.0/SjFe:经BamHI和乃口I双酶切后，出现2条带，其中一条大小约为520bp，与预期大小相符(图 3);PcDNA3.0/GM一CSF经众口I与KPnl双酶切后，出现2条带，其中一条大小约为400bp，与预期大小相符(图4);pcDNA3.0/S，’ Fer一oM一esF是在 PcDNA3.0/SjFe:的基础上加入GM一CSF构建而成，经乃口I与助nl双酶切得到的2条带中，其中一条带约为goobP，与预期大小相符(习凡r+GM一csF，图5)。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R392;S852.5

【参考文献】

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1 李小红;血吸虫致弱疫苗的研究进展[J];国外医学(寄生虫病分册);2003年03期

2 韩海勃;曹建平;;日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆表达及其免疫原性研究[J];国际医学寄生虫病杂志;2006年01期

3 邱元;黄复深;陈尔曼;郝知友;袁鑫;;GM-CSF与猪瘟病毒E_2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2007年02期

4 张冉,易新元,曾宪芳,张顺科,Larry Mc Reynolds;日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究[J];寄生虫与医学昆虫学报;2004年03期

5 周爱琴,张仁利,石淑华,龙彩虹,高世同,林敏,吴少庭;日本血吸虫Calpain的DNA疫苗诱导小鼠免疫保护性研究[J];中国热带医学;2003年01期

6 黄复深,易新元,曾宪芳,唐连飞,张顺科,Larry McReynolds;重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究[J];中国热带医学;2003年06期

7 陈欲晓,易新元,曾宪芳,唐连飞,王林纤,蔡春,袁仕善;日本血吸虫Sj31核酸疫苗联合IFN-γ重组质粒诱导小鼠保护性免疫的研究[J];中国热带医学;2004年03期

8 黄复深,易新元,曾宪芳,唐连飞,Larry Mc Reynolds;日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3.1/SjMf1粘膜免疫小鼠的保护力研究[J];中国热带医学;2004年03期

9 罗永慧,易新元,曾宪芳,蔡春,张顺科;重组日本血吸虫32kDa蛋白和铁蛋白联合免疫保护作用的研究[J];热带医学杂志;2003年04期

10 杜德伟,周永兴,冯志华,姚志强;IL-12的真核表达载体增强小鼠对DNA疫苗的免疫应答[J];细胞与分子免疫学杂志;2000年03期

本文编号：2553348