伤寒沙门菌耐药质粒pRST98在小鼠体内向大肠埃希菌接合转移的研究

发布时间：2019-10-29 23:45

【摘要】： 目的：研究伤寒沙门菌耐药质粒pR_(ST98)在小鼠体内向大肠埃希菌的接合转移，比较质粒在体内外接合转移的异同及影响因素。 方法：由于伤寒沙门菌是一种严格只对人类致病的病原菌，没有合适的动物模型，因此将伤寒沙门菌的耐药质粒pR_(ST98)导入遗传背景明确的鼠伤寒沙门菌低毒株RIA中，形成接合子pR_(ST98)／RIA，口饲BALB／c小鼠进行体内耐药质粒接合转移的研究。 1．将伤寒沙门菌耐药质粒pR_(ST98)导入大肠埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)(F~-)Rif~r Lac~+，获得接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)，再以接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)为供体，将pR_(ST98)导入鼠伤寒沙门菌低毒株RIA，获得接合子pR_(ST98)／RIA。用药敏试验和质粒检测接合子的形成。 2．用SS培养基分离培养未经人工感染小鼠体内的大肠埃希菌，生化反应鉴定获得的菌株，用药敏试验和质粒谱调查小鼠肠道细菌耐药和质粒携带状况。比较小鼠肠道分离菌株耐药谱和pR_(ST98)编码的耐药性差异，以此制备SS抗生素选择性培养基。 3．20只5周龄BALB／c小鼠，雌雄各半，体重18-20g，每组5只随机分为4组，以低于pR_(ST98)／RIA半数致死量(LD_(50))的四种菌量(10~8、10~7、10~6、10~5 CFU／ml)分别口饲4组小鼠。从第2天起至30天每天用SS抗生素选择性培养基分离小鼠肠道大肠埃希菌。用生化反应鉴定后药敏试验确定耐药谱，并进一步用质粒检测验证pR_(ST98)在小鼠肠道内发生的接合转移。 结果：1．在体外伤寒沙门菌很容易将耐药质粒pR_(ST98)转移给大肠埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)(F~-)Rif~r Lac~+，接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)又可将pR_(ST98)转移给鼠伤寒沙门菌RIA，，但在不同种属中pR_(ST98)接合难易程度不同，同一质粒在不同宿主菌中耐药标志的表达亦有差异。接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)中Sm和Gm耐药标志未表达，接合子pR_(ST98)／RIA中除Sm和Gm外，Cos的耐药标志亦未表达。 2．从未经人工感染小鼠肠道分离了100株大肠埃希菌，所有菌株均有不同程度的耐药，其中对Ap的耐药率高达97％，Sm的耐药率为42％，但所有菌株对Akn和Cp均敏感。未发现分离的小鼠肠道菌与pR_(ST98)有相同的耐药谱，据此分别选择Cm和Cp两种抗生素制备SS抗生素选择性培养基。质粒检测未发现小鼠肠道菌有分子量与pR_(ST98)相近的耐药质粒存在。 3．口饲pR_(ST98)／RIA后，第2天SS抗生素选择性培养基即可筛选到耐受pR_(ST98)编码抗药性的红色菌落，阳性率为40％(8／20)，第3天为65％(13／20)，第4天为80％(16／20)。第8、11和16天，菌量为10~8 CFU／ml组小鼠各死亡1只，第13天菌量为10~7 CFU／ml组小鼠死亡1只，至第30天共死亡4只。第30天抗生素选择性培养基分离菌株的阳性率为81％(13／16)。口饲pR_(ST98)／RIA菌量与各组小鼠间肠道菌阳性分离率未见有直接关系。经生化反应鉴定，分离的菌株均为大肠埃希菌。药敏试验显示阳性菌株的耐药谱发生改变，新出现的部分耐药标志与pR_(ST98)的耐药谱相符，但有些抗生素的耐药标记未能全部表达。质粒检测显示体内形成的接合子均含耐药质粒pR_(ST98)。 结论：1．在体外耐药质粒pR_(ST98)可以从伤寒沙门菌S. typhi转移给大肠埃希菌E. coliK_(12)W_(1485)，接合子pR_(ST98)／E. coliK_(12)W_(1485)又可将质粒转移给鼠伤寒沙门菌S. typhimurium RIA。2．从未经人工感染小鼠体内分离的大肠埃希菌药敏试验发现，所有菌株对抗生素均有不同程度的耐药。3．在小鼠体内pR_(ST98)／RIA很容易发生接合转移，经生化反应证实获得的接合子均为大肠埃希菌。4．伤寒沙门菌耐药质粒pR_(ST98)在动物体内外的接合难易程度不同，同一质粒在体内外不同宿主菌中耐药标志表达亦有差异，显示耐药质粒表达的多样性和复杂性。
【图文】：

图1.伤寒沙门菌耐药质粒PRsTg。琼脂糖凝胶电泳A和NE.eoliV517，标准分子量(35.8，4.8，3.7，3.4，2.6，2.0，1.8，1.4)MdB和Ms.fiexneri2457。，标准分子量(140，105，2.6，2.0)MdC和L对抗生素敏感的伤寒沙门菌D一K多重耐药伤寒沙门菌

Rs丁98体外接合转移前后供受体菌和接合子的耐药谱抗生素CmCosSmGmKmAknCPNmAPCb485RRRRRif+Cm‘，‘R口口口RRRRRCm+AP株对某种抗生素耐药(Resistanee)Tg:从供体向受体转移后接合子中未表达的耐药标志合转移时培养基中加入的选择性抗生素
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R378

【参考文献】

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本文编号：2553672