小鼠睾丸支持细胞诱导小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的实验研究

发布时间：2019-11-13 20:03

【摘要】：研究背景和目的 胚胎干细胞(ESC)具有全能性,能够分化成一个完整生命个体所需之各式各样的不同的细胞。ES细胞定向诱导分化是目前国际上研究的热点,其中ES细胞向生殖细胞的分化是一个非常新的领域。近年来,在移植研究中用原始生殖细胞(PGC)和生殖干细胞(GSC)来改善生育已经取得了不同程度的成功,这使研究者们把研究深度进一步加深,用ES细胞作为生殖细胞分化的起始点。到目前为止,共有五个实验室分化成功。这五个实验室都是先将胚胎干细胞分化成类胚体(EB),EBs包含早期胚胎典型的组织系统,再加一些诱导剂或条件培养基或者只是让细胞自发分化,一段时间之后可以检测到生殖细胞标志分子的表达。本研究是将小鼠睾丸支持细胞与ES细胞共培养,支持细胞与ES细胞形成细胞间接触,同时支持细胞还可以分泌一些细胞因子如骨形态发生蛋白(BMP—4),在这两种因素的作用下,诱导ES细胞向生殖细胞分化,目的在于用模拟体内的微环境来诱导ES细胞分化成生殖细胞。我们将小鼠睾丸支持细胞与ES细胞共培养,在一定的时间点用RT-PCR,原位杂交,免疫组化和Western-Blotting检测生殖细胞标志分子的表达;其中鼠vasa同源体(Mvh)的表达有力证实了小鼠ES细胞分化成生殖细胞。通过该研究,我们用模拟体内的微环境诱导ES细胞分化成生殖细胞,建立一种相对稳定的体外分化系统,有助于分析生殖细胞分化过程中的基因演变和外遗传的程序重调,有助于核转移技术的发展和不育治疗。 第一部分 小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定 方法:取18～20天雄性ICR小鼠的睾丸,酶消化法原代培养。用RT-PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因(SERZ),与pcDNA3.0连接后构建重组质
【图文】：

图IB相差显微镜下的支持细胞(ZxOO)FigIBSCunderPhase一eonrtastmieorseoPe(x200)电镜观察支持细胞在电镜下有特征性结构，对细胞进行电镜观察。电镜下，支持呈三角形或不规则形，染色浅，核仁明显，胞质内细胞器比较丰富，、溶酶体和线粒体较多，相邻细胞之间形成紧密连接(图ZA一D)。

质逐渐增大，折光性减弱。3一4d后细胞铺成膜状单层，，细胞间隙变小，呈圆形或椭圆形。4一6d细胞完全铺开。细胞多为多边形，有较大核仁，其形态和胞质面积不再改变(图IA一B)。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329

【引证文献】

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1 周雪原;大鼠骨髓间充质干细胞对不育大鼠生殖系统修复作用的研究[D];内蒙古大学;2012年

本文编号：2560461