钛合金颗粒对体外培养人成骨细胞作用的实验研究

发布时间：2019-11-14 19:07

【摘要】：目的:研究钛合金颗粒对体外培养条件下的成骨细胞增殖、分化能力的作用以及骨保护素(OPG)基因表达的影响,探讨人工关节假体松动中磨损颗粒导致的骨溶解机制。 方法:1、取人胚胎颅骨骨膜,采有用酶消化法和组织培养法获取成骨细胞体外培养并传代,观察细胞形态,生物特点及成骨特性,并绘制生长曲线同时碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞以及比较冻存前3-5 代与冻存后成骨细胞的特点。2、电镜下观察钛合金颗粒的形态并测量其粒径,将不同浓度的钛合金颗粒(1mg/ml,0.1mg/ml,0.01mg/ml)与成骨细胞共同培养,分别于第2、4、6 天用MTT 法测量细胞增殖情况及4、7、10天用试剂盒检测碱性磷酸酶活性。3、分别将不同浓度的钛合金颗粒(1mg/ml,0.1mg/ml,0.01mg/ml)与成骨细胞基因培养3、6、9 天用RT-PCR 方法半定量测定骨保护素(OPG)基因mRNA 的表达。并用统计软件对数据进行统计分析。 结果:1、培养的骨膜成骨细胞形态多为梭形和多角形与成纤维细胞相似,3-5 代成骨细胞生长特点稳定,具有成骨能力,冻存后成骨细胞生存率,增殖能力明显受到影响。2、①钛合金颗粒直径90%小于3μm,与体内检测到磨损颗粒大小基本一致。②10mg/ml 组钛合金颗粒抑制了成骨细胞的增殖(P0.05),0.1mg/ml 和0.01mg/ml 组对成骨细胞的增殖影响不明显。③不同浓度的钛合金颗粒对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性均有影响(P0.001),高浓度组对ALP 的影响较低浓度组更为显著。3、不同浓度的钛合金颗粒均抑制了成骨细胞骨保护素(OPG)基因表达,随时间延长,0.01mg/ml 组对OPG 基因作用逐渐降低。 结论:1、自骨膜获取人成骨细胞培养方法易形,可大量培养高纯度的人成骨细胞供研究使用,冻存细胞不易作为研究对象。2、钛合金颗粒对成骨细胞的增殖和成骨能力均有抑制作用,对成骨能力的影响更为显著。3、钛合金颗粒使成骨细胞OPG 基因表达下降。
【图文】：

72℃、1min，30 个循环，72℃后延伸 10min。 5ulRT 一 PCR 产物加入 5μl 上样缓冲液与 100bpmaker 在 1射仪观察结果，用复日 FR－980 生物电泳图像分析系统（测定相对积分光密度，并与内参照β-actin 的光密度比较。结果） 经严格去 Rnase 处理后，总 RNA 抽提物经 1.5%琼脂糖凝解。） RT-PCR 产物经 1.5%琼脂糖电泳显示如图 3-2，电泳第一 DNAmarker，由上至下分别为 2000bp，1000bp，750bp，50十三道为 RT-PCR 基因产物介于 300bp 与 400bp 之间，约为因片断。

第l-2天时，，细胞贴附于瓶底，大部分仍为圆形
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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本文编号：2560952