降胆固醇功能乳杆菌的筛选及降解机理研究

发布时间：2019-11-21 07:57

【摘要】： 胆固醇摄入过量带来的高脂血症、冠心病、动脉硬化等心血管疾病已经严重危害到人体健康,如何减少胆固醇摄入量、降低人体血清胆固醇水平的研究越来越受到广泛关注。国外已有大量关于乳酸菌降胆固醇作用的文献报道,但具体的筛选指标、去除机理等尚不明确,本研究旨在分离出来源于健康人体肠道的乳杆菌菌株,通过耐胆盐能力、生长能力、体外降胆固醇量、去结合胆盐能力等一系列指标评价乳杆菌菌株的降胆固醇综合性能,筛选出具有很好的降胆固醇性能的潜力菌株用于益生菌制剂的开发应用,同时通过引入胆酸-胆固醇共沉淀曲线、有无添加胆汁盐时菌株体外去除胆固醇量比较等方法探讨乳杆菌降胆固醇作用的机理,为优良菌株的筛选提供理论指导。 首先通过选择性培养基平板涂布法筛选得到若干乳杆菌,经革兰氏染色选出阳性且形态特征符合乳杆菌的菌株。用乳杆菌特异引物将分离得到的细菌总DNA进行PCR扩增,得到500bp左右乳杆菌特异片段,将产物进行测序,通过序列比对鉴定到种,用于进一步实验。 对6个种共14株乳杆菌的胆盐耐受性评价表明,有11株对2.8mM甘胆酸钠和1.2mM牛磺胆酸钠混合胆汁盐耐受性很好,迟滞期小于2.00h,4株在6mM牛磺胆酸钠胆汁盐中迟滞期小于2.00h,且几乎几乎所有菌株对甘胆酸钠的耐受性比都对牛磺胆酸钠更强。 菌株体外降胆固醇能力研究发现,有7株菌在添加2.8mM甘胆酸钠和1.2mM牛磺胆酸钠混合胆汁盐的培养基中对胆固醇的去除量在20.00μg/ml以上,其中6株在6mM牛磺胆酸钠中的去除量也高于20.00μg/ml。且研究表明,降胆固醇能力具有明显的菌株间差异。 菌株去结合胆盐能力评价结果发现,去结合胆盐能力同样有明显的菌株间差异。其中有4株的产胆酸量较高,在3.50-5.00μmol/ml之间。综合三个筛选指
【图文】：

图 1.5 BSH 酶水解结合胆盐示意图Figure1.5 Hydrolyzation of conjugated bile salt by BSH存在对乳酸菌自身及其宿主有很多影响[44]，包括：胆盐毒性

图 3.1 Lp529 和 Lp501 的革兰氏染色图片Figure 3.1 The Gram-coloration pictures of Lp529 and Lp501用乳杆菌属 16S rDNA 特异引物针对这些菌株的 DNA 进行 PCR 扩增，得到约 500bp 的乳杆菌 PCR 片段，，产物经 1％琼脂糖凝胶电泳，用凝胶图像分析系
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R371

【引证文献】

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本文编号：2563909