脐血间充质干细胞向肝样细胞和胰岛样细胞的分化研究

发布时间：2019-11-21 18:19

【摘要】：目的： 培养扩增脐血(Umbilical cord blood，UCB)间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)；探索脐血间充质干细胞分化为肝细胞，胰岛细胞的条件；观察体外诱导的胰岛样细胞能否在1型糖尿病小鼠模型体内发挥降糖作用。 材料方法： 1．羟乙基淀粉沉淀法分离脐血中的有核细胞，以Mesencult~(TM)培养基(含10％的生长添加物)培养。 2．流式细胞仪检测细胞表面抗原，测定细胞周期。 3．DMEM／F12+10％FBS+1μmol／L地塞米松+5U／ml胰岛素，向脂肪细胞诱导，0.375％油红O染色法，观察诱导后细胞浆中的脂滴。 4．DMEM／F12+10％FBS+0.1μmol／L地塞米松+10mmol／L B-磷酸甘油+50μmol／L维生素C向成骨细胞诱导，碱性磷酸酶(钙—钴法)和钙沉积(von Kossa法)判断诱导的细胞是否具有成骨细胞的特征。 5．DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF(Hepatocyte growth factor，HGF)+10ng／ml EGF(Epidermal growth factor，EGF)+1×ITS(Insulin-transferrin-selenium，ITS)诱导2周，DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF+10ng／ml Oncostatin M+1×ITS继续诱导2周，向肝细胞诱导分化。 6．向胰岛细胞诱导 方案一：H-DMEM含5％FBS持续诱导；方案二：DMEM／F12(不含FBS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巯基乙醇诱导7d，含5％FBS的H-DMEM继续诱导；方案三：DMEM／F12(不含FBS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巯基乙醇诱导7d，，H-DMEM培养基添加3ng／ml Activin A和10ng／ml HGF继续诱导。
【图文】：

图1.流式细胞仪检测脐血MSCs表面抗原的表达.其中cD13，cCD106阳性率分别为99.8%，915%，HLA一DR阳性率分别为14.3%，4.8%98%，33.3%:CD14，CD45，CD34，CD6%，1.8%，2.3%，2%

图2.脐血MSCS培养过程中的形态变化(放大倍数10OX).A培养2周贴壁细胞以短梭形细胞为主，混有圆形、椭圆形细胞.B培养35d，原代较均一的梭形细胞，混有部分圆形细胞.C传代72h的脐血MSCs，形态较均一，呈放射状生长.D3代的脐血MSCs，形态均一，呈平行排列.妙洲孤蜘俨魂枷少嘟才狱娜娜淤噢一爪\缈辛杖那女
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R329

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 冯德鹏;李雪莉;范炎;;脐血间充质干细胞的研究进展[J];国际老年医学杂志;2010年05期

2 周秀娟;闫醒军;何延政;刘勇;施森;江隽;;人外周血、脐血、脂肪组织来源的内皮祖细胞部分生物学特性比较[J];中国动脉硬化杂志;2011年08期

3 吴玉卓;陈红;;脐血间充质干细胞体外诱导成肝细胞的研究进展[J];中国肝脏病杂志(电子版);2008年02期

4 隆玄;吴晓丹;施劲东;李善群;;间充质干细胞在急性肺损伤中的应用进展[J];中国临床医学;2011年03期

5 杨光忠;陈文明;;间充质干细胞的免疫调节功能[J];临床合理用药杂志;2011年31期

6 王燕茹;张育;;间充质干细胞与类风湿关节炎[J];实用医学杂志;2011年16期

7 程庆;白志明;;间充质干细胞归巢的研究进展[J];中国现代医学杂志;2011年09期

8 傅强;;他达拉非可对干细胞产生持久而稳定的保护作用[J];中华男科学杂志;2011年08期

9 瞿海龙;麻晓静;张冰;梁璐;;基因修饰的间充质干细胞在急性心肌梗死中的应用前景[J];中西医结合心脑血管病杂志;2011年07期

10 郭玲玲;李明;邢爽;罗庆良;;间充质干细胞治疗重症急性放射病研究的新进展[J];中国实验血液学杂志;2011年03期

相关会议论文 前10条

1 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年

2 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

3 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年

4 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年

5 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

6 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

7 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

8 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

9 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年

10 郭振兴;郑翠玲;陈振萍;董文川;杨仁池;;胚胎骨髓来源的间充质干细胞对人Th17细胞免疫调节作用的研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 王秋月　王琳;空军总医院采用间充质干细胞救治小脑萎缩[N];科技日报;2009年

2 记者 李素锋;我市首例间充质干细胞移植手术取得成功[N];临汾日报;2009年

3 记者 王丹　通讯员 艾素;异染性脑白质营养不良治疗获突破[N];健康报;2010年

4 本报记者 杨阳腾;北科生物：让干细胞创造医学奇迹[N];经济日报;2011年

5 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年

6 张泓;生物医药,2008新突破[N];北方经济时报;2008年

7 徐机玲;姜跃进;我国骨髓干细胞移植技术获突破[N];中国医药报;2003年

8 深圳特区报记者 范京蓉;5年专注研发 技术领先世界[N];深圳特区报;2011年

9 时报记者 杨晓帆;韩忠朝:中国干细胞研究领军者[N];滨海时报;2010年

10 张献怀 王志红;抗排异反应有了新办法[N];保健时报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年

2 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年

3 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

4 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年

5 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年

6 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年

7 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年

8 田X;P38 MAPK参与调节人脐带间充质干细胞对人白血病肿瘤细胞的生长抑制[D];北京协和医学院;2011年

9 苗宗宁;胎盘间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料在骨创伤修复中的实验研究[D];苏州大学;2010年

10 梁伟;人骨髓Flk-1~+间充质干细胞抗DNA损伤物质影响作用研究[D];中国协和医科大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年

2 陈芳;脐带间充质干细胞修复化疗所致卵巢颗粒细胞损伤的体外实验[D];暨南大学;2010年

3 陈嘉;脂肪来源的间充质干细胞体外转分化内皮细胞及褪黑素调控研究[D];北京协和医学院;2011年

4 张茜真;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究[D];浙江理工大学;2010年

5 卫佳;干细胞因子修饰的脐带间充质干细胞对造血干细胞的作用[D];北京协和医学院;2011年

6 陈义;脐带间充质干细胞培养及体外重建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2010年

7 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年

8 齐凯;人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化初探[D];山西医科大学;2011年

9 马兰兰;不同胎龄人脐带血间充质干细胞的研究[D];中国医科大学;2010年

10 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年

本文编号：2564114