热激蛋白HSP70融合蛋白疫苗的抗肿瘤作用研究以及HSP70在免疫调控中的作用

发布时间：2019-11-26 16:32

【摘要】： HSP70是一类ATP依赖的分子伴侣，分子量约为70kDa。用肿瘤组织中提取的HSP70对小鼠进行免疫，可以预防相应肿瘤的发生和生长。最近的研究表明HSP70携带的小肽及其ATPase结构域是HSP70抽提物激活肿瘤特异性免疫反应的关键。根据这些发现，我们推测肿瘤相关性抗原蛋白和HSP70的融合蛋白能用于免疫治疗，激活机体抗原特异性免疫反应，抑制肿瘤生长。本论文的工作针对以HSP70为基础的融合蛋白进行了一系列的抗肿瘤研究。 在第一章中，我们构建了包含HSP70家族中组成型表达的Hsc70蛋白N端ATPase结构域(Hsc70NTD)和B16肿瘤相关性抗原TRP2的融合蛋白，并利用分子筛层析的方法解决了包涵体的复性问题。融合蛋白的复性情况可以通过其ATPase活性得以测定。用融合蛋白免疫小鼠后，在其体内检测到了TRP2特异性淋巴细胞免疫反应，而且对免疫后的小鼠进行B16肿瘤接种实验，肿瘤的生长明显受到抑制。 在第二章中，我们将肿瘤相关性抗原TRP2与全长HSP70融合，发现融合蛋白Hsp70-TRP2的免疫效果优于只含有HSP70的N端ATPase结构域的融合蛋白HspTONTD-TRP2。我们认为Hsp70融合肿瘤相关性抗原的抗肿瘤的过程，包含抗原依赖性的CTL诱导和非抗原依赖性的免疫反应的活化两种不同的机制。 在第三章中，我们构建了四种融合B16相关性抗原的HSP70融合蛋白对小鼠进行联合免疫，发现相比于单一种类的HSP70融合蛋白，多种HSP70融合蛋白联合免疫可以避免肿瘤细胞因丢失肿瘤相关性抗原引起的免疫逃避，具有更好的抗肿瘤效果。同时对非B16肿瘤细胞，联合免疫也有一定的预防作用。
【图文】：

图2.重组蛋白的表达与纯化70NTD一TRPZ，Hse70NTD和TRPZ。相应的转化子在IPTG的诱导下均表达出了目白，占总蛋白的50%以上，，见图2。其中除了Hsc70NTD同时以可溶蛋白和包两种形式存在与发酵产物中，Hs。70NTD一TRPZ和TRPZ均为包涵体。我们尝试改变表达条件如降低表达温度，降低IPTG浓度等，期待获得可溶性Hsc70NTD一TRPZ和TRPZ，但均没有成功。我们也尝试更换表达载体，融合GST目的蛋白上使表达产物可溶化，这种尝试也没有成功。目的蛋白包涵体经反复的洗涤后，纯度大于95%，见图2。虽然我们获得了可溶性Hsc70NTD，为实验有可比性，我们从包涵体中纯化Hsc7ONTD。目的蛋白经SDS一PAGE电考马斯亮兰染色确定其浓度和纯度。.重组蛋白的复性和ATpase酶活检测包涵体用含SM尿素的变性缓冲液溶解，过SephadexG一25柱使其复性。复性，上样lml，样品中蛋白质浓度用变性缓冲液调整为0.5mg/m1。用紫

Seohedex8-25柱诬性蛋白质
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【引证文献】

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1 高海霞;松江鲈（Trachidermus fasciatus）热应激蛋白及相关蛋白的cDNA克隆与原核表达[D];山东大学;2011年

本文编号：2566208