应用RNAi阻断AhR介导的TCDD免疫毒理作用的初步研究

发布时间：2019-12-06 10:26

【摘要】：2,3,7,8-四氯二苯-对-二VA英(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)是环境污染物多氯联苯类化合物中毒性最强的一种。研究发现, TCDD 有强烈的致癌、致畸、致病的毒性作用,对人体的免疫系统、生殖系统、神经系统、内分泌系统等产生严重损伤,并危害肝脏、眼睛、皮肤等多种器官的功能。因此研究其作用机制具有重要的理论意义和临床价值。免疫系统是对TCDD 最敏感的靶系统之一,TCDD 对机体的细胞免疫、体液免疫和抵抗力都有显著的抑制效应。而隐藏在这一系列功能改变下面的分子水平机制研究也逐渐得到深入。TCDD 的芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)介导途径、TCDD 对多种激酶信号转导途径的干预、对细胞内Ca2+代谢、自由基代谢的影响、TCDD 与激素受体的相互作用是近年来研究的几个主要方向。其中,以TCDD的AhR 介导途径得到最多的关注。 AhR 被认为是TCDD 在细胞内的重要受体,在TCDD 免疫毒性介导途径中起到重要作用,其可能机制是,AhR 与TCDD 结合后被激活,随即进入细胞核结合AhR核转位因子,然后通过识别并结合效应基因的启动子、增强子等基因调控元件,增强或抑制效应基因的表达,从而直接或间接影响淋巴细胞的功能。我们的前期研究也发现:○1 TCDD 对B 淋巴细胞的功能存在显著的抑制效应;○2 B 淋巴细胞存在AhR;○3 AhR 是TCDD 抑制B 淋巴细胞功能的重要介导途径;○4可能有非AhR 依赖的信号转导途径存在。同时也有其他实验室研究资料表明,AhR并非是TCDD 毒理效应的唯一介导途径。综合以上研究资料可以看出,如采用一定研究手段抑制TCDD毒理作用中AhR基因的表达,可具有以下两方面的意义,1)观察抑制AhR表达是否阻断TCDD免疫毒性作用,为TCDD中毒症状的治疗提供靶点及理论依据;2)观察AhR表达的下降程度与TCDD免疫毒性的减弱程度之间的关系,明确AhR在TCDD免疫毒性作用介导过程中的地位,进一步揭示TCDD的毒性作用机制。近年在分子生物学研究领域引起广泛重视的RNA干扰(RNA interference,RNAi)
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)信号转导途径的干预、对细胞内Ca代谢、自由基代谢的影响、TCD相互作用是近年来研究的几个主要方向[11-14]。其中，，以TCDD的Ah最多的关注。1976年Polland等[15]发现AhR的存在以来，AhR最受关注的作用是它在谢机制中的重要地位[16]，如对细胞色素P450超家族1A家族1型酶(CyA1，Cyp1a1)的诱导合成等；另一个就是它对TCDD毒性的介导作用免疫系统，尤其是淋巴细胞的抑制效应即是其中一个重要方面。现有AhR介导TCDD毒性的大体机制[18]是：静息状态的AhR与两分子热休克存在于细胞浆；当与TCDD结合以后被激活，释放热休克蛋白90，然后因子(AhR nuclear translocator, ARNT)等数种辅基结合，并由细胞浆转通过与效应基因的启动子、增强子等基因调控元件内的特异识别XRE等)结合，增强或抑制效应基因的表达，从而直接或间接影响淋巴

作用机制模型,哺乳动物细胞

18图 3.哺乳动物细胞内 RNAi 作用机制模型 RNA interference in mammalian cells. Short hairpin RNAs dsRNA stems, are expressed from RNA polymerase III proorated into the RNA induced silencing complex (RISC), resognate mRNAs. Small interfering RNAs (siRNAs), contain bypass the requirement for Dicer and are directly incorpor[51].被开发利用来作为一项继基因敲除(gene knock o表达的得力工具[37]。Boutros等[38]运用高产量)分析了19,740个果蝇培养细胞内的双链RNA(dsR测基因的功能进行检测，发现了其中438个dsRN
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392.1

【参考文献】