脂质体包裹人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒的构建
【图文】：
粒pcDNA3．1+KpnI和XbalI双酶切产物鉴定两种质粒双酶切的产物经0．8%琼脂糖凝胶电泳检测显示(图1)，穿梭质粒PHMCMVTSHＲ289PCＲ产物双酶切后的条带大小为867bp，真核质粒pcDNA3．1+双酶切后条带大小为4459bp。2．2重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289HindⅢ酶切鉴定重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289用HindⅢ酶切后产物经0．8%琼脂糖凝胶电泳检测显示(图2)，出现512bp小条带。2．3重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289公司测序鉴定重组质粒送至上海英俊生物技术有限公司进行正向和反向测序，吻合度均达到99%。正向测序发现AAC突变为图1pcDNA3．1+和PNMCMVTSHＲ289PCＲ产物双酶切后0．8%凝胶电泳图注:Maker为Lambda，DNA/EcoＲI+HindⅢMarker，3。图2连接产物HindⅢ酶切后重组质粒出现512bp小条带注:Maker为LambdaDNA/EcoＲI+HindⅢMarker，3。图3阳离子脂质体(箭头)。AAT，为同义突变。反向测序发现GCG突变为GCT，，亦为同义突变。2．4阳离子脂质体包裹重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289制作出的DOTAP/Chol阳离子脂质体用ZETASIZEＲ激光粒径分析仪(英国MalvernInstruments公司)测得粒径平均值为92．3nm，测得最高峰值为126．0nm(图3)。阳离子脂质体与质粒DNA的体积质量比例为3∶1。2152国际眼科杂志2014年12月第14卷第12期www．ies．net．cn电话:029-8224517282210956电子信箱:IJO．2000@163．com
in，即得DOTAP/Chol阳离子脂质体(5mg/mL)。pcDNA3．1+/TSHＲ289重组质粒与DOTAP/Chol阳离子脂质体按照质量体积比1∶3混合。2结果2．1穿梭质粒PHMCMVTSHＲ289PCＲ产物和真核质粒pcDNA3．1+KpnI和XbalI双酶切产物鉴定两种质粒双酶切的产物经0．8%琼脂糖凝胶电泳检测显示(图1)，穿梭质粒PHMCMVTSHＲ289PCＲ产物双酶切后的条带大小为867bp，真核质粒pcDNA3．1+双酶切后条带大小为4459bp。2．2重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289HindⅢ酶切鉴定重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289用HindⅢ酶切后产物经0．8%琼脂糖凝胶电泳检测显示(图2)，出现512bp小条带。2．3重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289公司测序鉴定重组质粒送至上海英俊生物技术有限公司进行正向和反向测序，吻合度均达到99%。正向测序发现AAC突变为图1pcDNA3．1+和PNMCMVTSHＲ289PCＲ产物双酶切后0．8%凝胶电泳图注:Maker为Lambda，DNA/EcoＲI+HindⅢMarker，3。图2连接产物HindⅢ酶切后重组质粒出现512bp小条带注:Maker为LambdaDNA/EcoＲI+HindⅢMarker，3。图3阳离子脂质体(箭头)。AAT，为同义突变。反向测序发现GCG突变为GCT，亦为同义突变。2．4阳离子脂质体包裹重组质粒pcDNA3．1+/TSHＲ289制作出的DOTAP/Chol阳离子脂质体用ZETASIZEＲ激光粒径分析仪(英国MalvernInstruments公司)测得粒径平均值为92．3nm，测得最高峰值为126．0nm(图3)。阳离子脂质体与质粒DNA的体积质量比例为3∶1。2152国际眼科杂志2014年12月第14卷第12期www．ies．net．cn电话:029-8224517282210956电子信箱:IJO．2000@163．com
【参考文献】
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【共引文献】
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3 陈
本文编号：2570935
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