日本血吸虫童虫差异表达蛋白质组研究和童虫差异表达基因SjEnol的克隆和表达

发布时间：2020-02-12 07:14

【摘要】：日本血吸虫病(Schistosomiasis japonicum)是一种严重危害人类身体健康、影响经济和社会发展的人畜共患寄生虫病。不同发育阶段的血吸虫虫体在蛋白表达、生理生化特征等方面都存在一些差异。血吸虫童虫是血吸虫在终宿主体内发育的早期阶段,一些童虫差异表达蛋白可能对血吸虫生长发育至关重要。本研究应用蛋白质组学技术分析、研究血吸虫童虫差异表达蛋白,克隆和表达了血吸虫童虫差异表达蛋白烯醇酶SjEnol基因,为研制抗感染的分子疫苗、诊断抗原、新治疗药物提供基础。 本研究应用双向电泳技术对日本血吸虫(中国大陆株)童虫(16日龄)和成虫(雌、雄虫,40日龄)虫体可溶性蛋白进行了分离,应用image—master软件分析童虫、雌虫和雄虫的双向电泳图谱,显示两个不同发育时期虫体在可溶性蛋白组分上分别分离到2000±69、1100±75和1310±18个蛋白斑点,这些蛋白斑点大部分在Mr 10～80 KD、pI 3～8的电泳图谱区域,其中童虫蛋白电泳图谱中呈现26±2个不同于成虫的特异表达蛋白斑点。 从童虫期差异表达的蛋白斑点中选取10个对比性最强的蛋白斑点进行质谱鉴定,结果成功地获得了其中5个蛋白斑点的肽指纹图谱检测数据,进一步通过MASCOT、ProFound和Scope等软件查询数据库对目标蛋白进行鉴定。结果表明这些差异表达蛋白主要参与蛋白信号转导、能量代谢、转录、翻译调控和作为细胞构架蛋白等。 基于日本血吸虫期别差异表达蛋白质组的研究分析结果,选择一个童虫差异表达的蛋白分子进行深入研究,通过质谱(ESI)分析鉴定得到该蛋白质的部分氨基酸序列,利用RACE、PCR技术克隆出该目的蛋白编码基因,其ORF的核苷酸序列有1305bp,推测编码434个氨基酸,同源分析表明该蛋白为日本血吸虫烯醇酶(SjEnol)。构建了原核表达质粒pET28 a(+)
【图文】：

结果表明蛋白质为putativearyl一alcoholdehydrogenaseAAD6、Glyeeraldehyde一3一PhosPhatedehydrogenase、Enolase和AnPahasePromotingeomPlexsubunitCDC26。详见附图1、2。分析显示T16和T18可能是同一蛋白，它们和Glyeeraldehyde一3一phosphatedehydrogenase有很高的的匹配，至于为什么在同一胶图上会出现同一蛋白分布在D2胶的两个不同位置上的情况，这可能是在样品提取过程中长的肚段被部分降解或修饰加工不同;也有可能这两种蛋白斑点并不代表同一蛋白分子，可能是同源性很高的两种蛋白，但是目前由于质谱检测技术的局限性，不能鉴定给出相关数据。第20页

雌虫童虫雄虫图2通过双向电泳分离的一个童虫期差异表达蛋白斑点的局部放大图白斑点的ESI检测数据:蛋白斑点经ESI质谱鉴定分析，获得一段可靠的氨基酸序列。R·TFRSERLAKYNQLLLGR.13’ARCE考ESI的反应引物:质谱的检测数据结合血吸虫密码子的编码规律，，按照简并密码子翻译的并密码子，依据统计学原理，共设计引物15条，分别进行CPR操作。实验结果可行，引物序列为:5’一TTGTGcATCGT从GCTCTTGGC从一3’。3’ARCE的反应结果的电泳图:
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R383.24

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 李萃,陈主初,肖志强,吴晓英,詹显全,李茂玉,冯雪萍,章晓鹏,李建玲,陈平,梁宋平;人肺鳞癌组织及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析[J];癌症;2004年01期

2 刘兰英;血吸虫卵壳蛋白基因的特性[J];国外医学(寄生虫病分册);1997年04期

3 蔡学忠,林矫矫,付志强,刘金明,李浩,叶萍,石耀军,陈永军,林邦发,施福恢;重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免疫试验[J];中国血吸虫病防治杂志;2000年04期

4 高馨,冯正;血吸虫基因组研究进展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年01期

5 刘庆中,沈继龙;日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3疫苗免疫保护性的观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2003年05期

6 吴涤,高兴政;日本血吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究[J];中国人兽共患病杂志;1997年05期

本文编号：2578743