体外负载乙型肝炎病毒抗原的人树突状细胞兔疫特性研究

发布时间：2020-03-20 23:31

【摘要】：HBV感染是一个世界范围的高感染率、高危害性的疾病。由HBV感染引起的慢性乙型肝炎是一种危害人民健康的严重疾病。目前，慢性乙型肝炎治疗药物主要是干扰素α和拉米夫定，但两者都不能清除cccDNA，病毒仍可复制，停药后病情会反复。对慢性HBV感染治疗上的深入研究仍是当务之急。 现有的基础和临床免疫学研究表明特异性细胞免疫是抗病毒免疫治疗的关键。而树突细胞作为目前已知的机体内最强大的抗原递呈细胞，机体免疫反应的始动者，在特异性细胞免疫中起着十分重要的作用，并与慢性乙肝的发病机理和治疗都有十分紧密的联系。以DC为基础的免疫治疗正成为慢性HBV感染和慢性乙型肝炎治疗研究的一个新方向。 我们通过分离人外周血，用贴壁法获取单核细胞，体外联合应用GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α，，培养诱导成熟DC。再选择适合的HBV抗原浓度，予以两次抗原冲击，使其成为负载乙肝抗原(HBsAg或HBcAg)的DC。再将抗原负载DC和自体T淋巴细胞混合培养，用四色法流式细胞术检测胞内因子，观测DC对T淋巴细胞的活化。 实验结果： 一．人外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α联合培养诱导，第7天收获成熟DC。其细胞形态典型，混杂细胞少。 南京医科人学映l了学位论文 FCM检测示DC表面分子分别为CD 1 a 55.53%、CD80 83.78%、DR 98.76%、CD86 99.08%、CD83 64.70%、CD4O 76.23%。A入ILR结果 显示，培养DC具很强的T细胞增殖效应。 二.抗原冲击构成抗原负载DC 用HBsAg或HBcAg抗原肤冲击培养Dc，第7天收获Dc后， 经免疫组化检测HBv抗原(HBSAg和HBcAg)，结果呈阳性。 FCM 检测DC表面分子无明显变化，并且N几R反应提高。 三、经丝裂霉素C处理的DC与自体维持淋巴细胞l:10混合培 养，5天后采用四色法测T淋巴细胞胞内因子，IFN~v和IL一4，评估 抗原负载DC对T淋巴细胞的活化效应。结果显示，在体外漫乙肝病 人HBsAg负载DC和HBcAg负载Dc的诱导都以激活Thl和Tcl细 胞为主。HBsAb阳性的健康人Dc负载HBsAg后还能产生明显增强 的Thl和Tcl细胞因子。虽然慢性乙型肝炎病人的培养DC较正常人 表面分子表达明显降低，抗原递呈功能缺陷。但其自体HBcAg负载 DC所活化的T淋巴细胞效益以Thl和Tcl细胞亚群占优势，而且对 激发Thl和Tcl的功能较皿sAg负载DC显著增强，为进一步开展 自体HBcAg负载DC的抗乙肝病毒治疗提供了一定的实验依据。
【图文】：

培养第五天DC

共聚焦显橄镜下的成熟DC
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【共引文献】

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本文编号：2592362