浙江地区幽门螺杆菌临床菌株cagA-vacA优势基因型及不同基因型菌株混合感染的调查

发布时间：2020-03-21 16:05

【摘要】： 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡和胃MALT淋巴瘤的病原体，也与胃癌发病密切相关。人群中几乎有一半终身感染Hp，但只有部分感染者发展为明显的临床疾病，其中部分原因可能与Hp的致病力不同有关。 Hp空泡毒素基因(vacuolating cytotoxin gene A，vacA)的产物(VacA)能使上皮细胞产生空泡变性；细胞毒素相关蛋白基因(cytotoxin-associated gene A，cagA)的产物(CagA)被Hp排泌入胃上皮细胞后会导致细胞骨架的重排，刺激胃上皮细胞产生炎细胞因子IL-8等，两者均为该菌重要的致病因子。 所有Hp菌株均含vacA基因，但只有50％左右菌株发现有空泡毒活性，而空泡毒活性与vacA基因型有关。一般认为，vacA基因含有信号区(s区)和中间区(m区)两个主要的可变区，s区存在s1a、s1b或s2亚型，而m区存在m1或m2亚型，s1/m1型毒素活性最强，s1/m2型毒素活性中等或偏弱，s2/m2型毒素活性极弱或无，进一步的研究也已发现了一些别的s区和m区亚型变异体(s1c、m1a、m1b、m1b-m2等)。 欧美国家分离的Hp菌株中约60～70％具有cagA基因，并发现感染cagA阳性和/或vacA s1/m1型菌株可能更易导致消化性溃疡的发生。韩国、日本 浙江人学顾1一学位论义 中又流多 等部分亚洲国家分离的Hp菌株中90％以上携带cagA基因，主要的vacA 基因型也有别于欧美国家，而且不同cagA基因状态和／或vacA基因型的菌 株在消化性溃疡和慢性胃病中的分布无显著性差异。 cagA和 vacA均为单拷贝基因，同一 HP菌株只有携带或不携带 cagA 基因两种情况，vacA的s区或m区各亚型不可能同时出现于同一Hp菌株 中，因而多种cagA携带状态和／或vacA亚型的存在表明其来源于不同Hp 菌株。近年国外文献己有报道，同一病人可感染多株不同cagA状态和／或 vacA基因型的Hp，且此类混合感染与消化性溃疡的发生密切相关，但国内 类似研究几乎没有。 因此，了解浙江地区患者单株式多株Hp感染、不同cagA状态和／或vacA 基因型的Hp菌株在消化性溃疡和慢性胃炎中的分布，对于明确本地区Hp 的致病机制、流行特点、感染来源等均有一定意义。 目的：了解浙江地区消化性溃疡和慢性胃炎患者分离的 Hp临床菌株的 cagA基因状态和 vacA基因型（agA个acA优势基因型的分布情况以及是否 存在不同基因型多株Hp混合感染现象。分析cagA基因和／或vacA基因 型、不同基因型Hp混合感染与胃病的关系。 方法：选择胃窦、胃体双份活检标本均培养出Hp的42例慢性胃炎（CG） 和 36例消化性溃疡（PU）患者作为研究对象，采用聚合酶链反应（PCR） 检测分离的 156份 Hp菌株 cagA基因、vacA基因的信号区＊）和中间区 （m）亚型，分析 Hp基因型及多株Hp混合感染在 CG和 PU中的分布。 部分优势基因型的扩增产物TA克隆后进行核苦酸序列测定。 结果：96．2％的分离自病人胃窦标本的 Hp菌株 （7厂8）cagA阳性， 97．4％的十应胃体标本中分离的Hp菌株（76／78）为cagA阳性，有1例（1．3％） 患者胃窦、胃体存在cagA状态不一的两株Hp混合感染。78例患者胃窦标 本分离的Hp菌株vacA基因分型中，sla／ml、slajmZ、sla／mlb、Sla／mlb－SZ 4种 vacA基因型菌株所占比例分另为 6．40（5／78）、55．lO（43／78）、26．9o ～2～ 浙江大学硕士学位论文 中又视要 （ZI／78）和 1．3O（l／78），混合感染率为3．80（3／78）。而相应的胃体标本 中，前述四种vacA基因型菌株所占比例依次为6．4％（5／78）、53．8％（42／78）、 25石％（20／78）和 3．8％（／78），混合感染率为 5．l％（4／78）。cagA十一slajmZ 和 cagA”－sla／mlb在胃窦标本分离的 Hp菌株中占引．3％（40／78）和 26．9％ 门1／78），而在相应的胃体标本来源的菌株中占5二．6％（41／78）和25．6％ u0门8人少数Hp菌株vacA基因的 s区和 m区不能分型，未发现sib、sZ 和 mla型。综合分离自胃窦、胃体标本的 Hp菌株基因型分析结果，20．5％ （ 6厂8）患者标本中检出不同基因型的多株 Hp菌株，同一胃内多部位采 样比单部位采样者有更高的混合感染检出率。Hp cagA基因、vacA基因型、 cagA八acA基因组合及不同基因型菌株混合感染在CG和 PU中的分布差异 均无显著性0＞0刀5人6株sla型Hp菌株的s区扩增产物与报道的sla型 60 90株核着酸序列同源性为 93，15－94．86％，4株 mZ型 Hp菌株的 m区扩 增产物与报道的mZ型87－203株核着酸序列之间同源性为93．63～97石1％。 结论：cagA＼sl a／mZ是浙江地区慢性胃炎或消化性溃疡中最主要的 HP 菌株的优势基因型，其次为 cagA＼sl a／m fo，部分菌株 vacA sla型和 mZ型 扩增片段的核着酸序列与国外文献报道参考菌株的序列有很高的同源性， 部分患者可同时感染不同C明A携带状态和／或不同VSCA基因型的多株Hp。 但cagA携带状态、各种vacA基因型、不同基因型混合感染的Hp菌株， 在 CG和 PU中的分布无显著性差异。
【图文】：

cagA)编码的CagA蛋白为该菌重要的致病因子18一川。vaeA基因为全长约3864一38ssbp的单拷贝基因l‘2一，3]，含有信号区(S区)和中间区(m区)两个主要的可变区(基因结构见图1)。vacA基因编码的空泡毒素能使上皮细胞产生空泡变性。vacA基因存在于所有Hp菌株中l‘2一，“l，但只有约50%菌株表达vacA蛋白[”]，其表达产量也有差异，这与vacA基因型的不同有关l8]。Aiherton等发现不同Hp菌株vacA基因序列差异主要位于S区和m区，并发现s区可分为sla、Slb和s2，m区可分为ml和mZ，如此vaeA基因可形成51a/ml、51ajmZ、5lb/ml、5lb/m2、52/mZ多个基因型[81，自然发生的SZzmx也已发现[

在微需氧环境下(气体成分为85%NZ、10%CO:和5%02)培养3一5天后，平板上菌落大小适中，，刮取菌落涂片革兰氏染色后镜检，形态典型(如弯曲状、海鸥状等)，见图4。刮取生长良好的Hp混悬于含30%灭菌甘油布氏肉汤的Eppendorf管内，保存于一70’C冰箱中，6个月后复苏成功率达85%以上。~25~
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R378

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本文编号：2593583