UVA对球型脂质膜模型内质粒DNA环状结构的破坏
本文关键词：UVA对球型脂质膜模型内质粒DNA环状结构的破坏，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：在有关细胞膜的光学性质研究中,发现细胞膜表面微小凹陷处呈现高亮,普遍认为是反射光在细胞膜的凹隐处汇聚导致。这说明细胞膜凹面具有聚光作用。球型细胞膜具有更大的凹面,且光的汇聚发生在其内部,如果汇聚的光能对球形膜内物质产生作用,对拓展细胞膜生物学功能的理解将具有重要意义。本文采用UVA直接辐照内含质粒DNA的巨大单室脂质体(Giant Unilamellar Vesicles, GUVs,一种理想的细胞膜模型),以探索球形的GUV膜结构能否通过反射汇聚UVA,增强其对GUV内部质粒DNA环状结构的破坏。目的1.探索质粒DNA不同浓度和分子量对GUV形态、GUV包裹的影响,筛选出制备GUV形态好、包裹量高的最优条件,构建内含DNA的球型脂质膜模型。2.筛选UVA破坏质粒DNA环状结构的辐照剂量,观察GUV能否增强UVA对其内部质粒DNA环状结构的破坏。方法1.根据GUV的制备液中pGV102-NC质粒DNA浓度分为：0.01μmol/L组、0.02 μmol/L组、0.04 μmol/L组、0.08 μmol/L组、0.12 μmol/L组、0.16 μmol/L组和对照组(只含去离子水)。根据GUV的制备液中质粒DNA分子量大小分为：2868bp组、6380bp组、8889bp组、37428bp组和对照组(只含去离子水)。观察每组GUV的形成情况、统计GUV直径分布、包裹率等。2.UVA辐照质粒DNA,根据辐照的剂量不同进行分组：1.83 MJ/m2组、3.69 MJ/m2组、7.37 MJ/m2组、14.74 MJ/m2组、29.49MJ/m2组、假照组和酶切组,凝胶电泳检测DNA环状结构的双链断裂情况。将GUV样品分为辐照GUV内的质粒DNA组、辐照GUV外的质粒DNA组、辐照质粒DNA组、假照GUV内的质粒DNA组、假照GUV外的质粒DNA组、假照质粒DNA组和酶切组,用1.83 MJ/m2的UVA辐照,用凝胶电泳检测每组DNA的双链断裂。结果1.较低浓度DNA (0.01～0.12μmol/L)对GUV的形成影响不大,但随着浓度的增加,GUV的直径分布逐渐向5～25μm集中,直至高浓(0.16μmol/L)度下GUV不能形成。当DNA浓度为0.04μmol/L,制备出GUV包裹率较高、形态好、内DNA含量高。DNA浓度从0.01 μmol/L到0.08 μmol/L时,GUV包裹率随着DNA的浓度升高而增加,0.16μmol/L时达到最高,随后,DNA浓度从0.08 μmol/L增加到0.12 μmol/L时,包裹率会随着DNA的浓度升高而降低。DNA分子量对GUV的形成影响不大,但对GUV的包裹率有较大的影响。DNA分子量从2868bp到6380bp时,GUV包裹率会随着DNA分子量增加而增加,随后,DNA分子量从6380增加到37428bp,包裹率则随着DNA的分子量升高而降低,最后在DNA分子量为37428bp时,包裹率为0。2.1.83～29.49 MJ/m2剂量的UVA辐照质粒DNA能明显观察到双键断裂,且断裂量随辐照剂量升高而增加。与GUV外质粒DNA相比,1.83 MJ/m2 UVA辐照GUV内质粒DNA环状结构的双链断裂略多。结论1.在一定浓度和分子量的质粒DNA溶液中,可通过电形成法制备出一定量直径5～35μm,内含0.12±0.08μmol/L DNA、形态良好的GUV,可为球形脂质膜结构的生物学功能研究提供内含DNA的脂质膜模型。2.高剂量的UVA能导致质粒DNA双链断裂,球形的GUV可增强UVA对其内部质粒DNA环状结构的破坏。
【关键词】：巨大单室脂质体 UVA DNA 双链断裂
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-6
- 中文摘要6-9
- 英文摘要9-13
- 前言13
- 第一部分 构建内含质粒DNA的球型脂质膜模型13-25
- 1 材料和方法14-18
- 2 结果18-23
- 3 讨论23-24
- 4 小结24-25
- 第二部分 UVA对球型脂质膜模型内质粒DNA环状结构的破坏25-31
- 1 材料与方法25-28
- 2 结果28-29
- 3 讨论29-30
- 4 小结30-31
- 全文总结31-32
- 参考文献32-35
- 文献综述35-40
- 参考文献36-40
- 致谢40-41
- 攻读硕士期间撰写和发表的学术论文41
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本文编号：259391
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