PCR-微孔板液相杂交检测深部致病真菌实验性研究

发布时间：2020-03-22 10:30

【摘要】：目的探索建立一种快速、敏感、特异检测深部真菌方法。方法以5′端标记有生物素来源于真菌28S rDNA保守序列的真菌通用引物对三属九种真菌进行PCR扩增后，，分别进行琼脂糖电泳和与5′端标记有地高辛的真菌通用探针或种特异性探针在PCR仪上90℃2分钟，55℃1分钟进行液相杂交，并将杂交产物固定于链亲和素包埋的微孔板中，经酶标抗地高辛抗体结合，底物显色。结果 1．真菌通用引物可广谱地扩增九种真菌，扩增片段为260bp，与文献报告一致。2．真菌通用探针可有效地检测九种真菌PCR扩增产物。3．真菌PCR产物经微孔板液相杂交法检测较琼脂糖电泳敏感32倍，分别为32fg、1fg。4．白色念珠菌种特异探针、新生隐球菌种特异探针、烟曲霉种特异探针在微孔板液相杂交过程中表现高度的特异性。5．微孔板液相杂交可同时检测多种深部真菌。6．微孔板液相杂交重复性良好。结论微孔板液相杂交可快速、简便、敏感、特异地检测深部真菌，可成为临床早期诊断深部真菌感染有效方法之一。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R379

【引证文献】