肾缺血再灌注损伤模型小鼠炎性反应信号相关研究

发布时间：2017-03-21 12:01

  本文关键词：肾缺血再灌注损伤模型小鼠炎性反应信号相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察小鼠肾脏缺血再灌注后,各个时间组血清中炎性细胞因子白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-a、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-6含量和肾脏组织中TLR4 m RNA、TNF-a m RNA、IL-1a m RNA、IL-6 m RNA和CSF2m RNA的水平变化,并初步探讨TLR4与各炎性因子信号在RIRI过程中的作用及相关机制。方法:建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型(使健康雄性C57BL/6小鼠双侧肾脏血供中断45分钟,松开夹子使双肾血流重新灌注)。设立正常对照(N)组、假手术(S)组、肾缺血再灌注I/R 4 h组、I/R 12 h组、I/R 24 h组,(S)组除不中断血供,其余操作均同手术组。用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测各实验组血清中IL-1、TNF-a、GM-CSF、IL-6的变化。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QRT-PCR)法分别检查各实验组小鼠肾脏组织中TLR4 m RNA、TNF m RNA、IL-1a m RNA、IL-6 m RNA和CSF2 m RNA的表达变化。结果:1.与正常对照组相比较,肾缺血再灌注I/R 4 h组、I/R 12 h组、I/R24 h组血清中IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF浓度均增高,且各指标的变化趋势基本相似,都在I/R 12h组升高最显著,之后逐渐下降,差别有统计学意义(P0.05)。2.与正常对照相比较,肾脏组织中TLR4 m RNA、IL-1a m RNA、IL-6m RNA和CSF2 m RNA水平均明显增高,差别有统计学意义(P0.05),且TLR4 m RNA与各炎性信号呈现相似的变化趋势,均于I/R 12h达到高峰TNF-a水平无显著变化。和(N)组比较,(S)组血清和肾脏组织中各因子含量均没有特别变化。分别进行TLR4 m RNA与IL-1a m RNA、IL-6 m RNA和CSF2 m RNA的线性相关分析,结果显示TLR4 m RNA与IL-1a m RNA呈显著正相关(r=0.793,P=0.002);TLR4 m RNA与IL-6 m RNA呈显著正相关(r=0.759,P=0.004);TLR4 m RNA与CSF2 m RNA呈显著正相关(r=0.772,P=0.003);本研究尚未发现TLR4 m RNA与TNF-a m RNA有相关性(P0.05)。结论:1.与对照组比较,I/R4h组、I/R 12h组、I/R 24h组血清中TNF-a、IL-1、IL-6、GM-CSF水平升高,12h组升高显著,说明在肾缺血再灌注损伤情况下,TNFa、IL-1、IL-6、GM-CSF参与早期肾脏损伤的发病过程。2.缺血再灌注后肾组织TLR4 m RNA的表达水平和IL-1a m RNA、IL-6m RNA和CSF2 m RNA的表达水平均高于正常对照组,且增高趋势与这几个炎性信号变化一致,均于12h增高最显著,随着再灌注时间延长,表达水平又下降。相关分析表明,缺血再灌注后肾脏组织中TLR4 m RNA的表达水平与IL-1a m RNA、IL-6 m RNA和CSF2 m RNA的表达水平有强相关性,提示Toll样受体可能通过介导炎性反应信号通路参与了肾脏缺血再灌注肾脏的损伤过程,在肾缺血再灌注损伤过程中发挥着重要的调控作用。
【关键词】：缺血再灌注 肿瘤坏死因子-a 白细胞介素-1 白细胞介素-6 集落刺激因子 Toll样受体
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692;R-332
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 绪论9-28
• 1.1 研究背景9-26
• 1.1.1 肾缺血再灌注损伤概述9
• 1.1.2 肾缺血再灌注损伤的病理机制9-17
• 1.1.3 肾缺血再灌注损伤与炎性因子17-22
• 1.1.4 Toll样受体与肾缺血再灌注损伤22-26
• 1.1.5 结语26
• 1.1.6 展望26
• 1.2 研究目的26
• 1.3 研究意义26-28
• 第2章 材料与方法28-33
• 2.1 研究对象28
• 2.2 试剂28
• 2.2.1 外科手术和解剖所用试剂28
• 2.2.2 实验试剂28
• 2.3 仪器设备设置28-29
• 2.4 试验方法29-31
• 2.4.1 动物模型的建立29
• 2.4.2 实验分组29
• 2.4.3 组织标本收集29-30
• 2.4.4 血清IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF指标的测定30-31
• 2.5 肾脏组织IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF以及TLR4基因的检测31-32
• 2.5.1 提取总RNA31
• 2.5.2 逆转录31-32
• 2.5.3 Real-time PCR32
• 2.6 统计学处理32-33
• 第3章 实验结果33-47
• 3.1 血清中各因子的变化33-34
• 3.2 各实验组肾脏组织中IL-1a m RNA表达水平的比较34-35
• 3.3 各实验组肾脏组织中IL-6 m RNA表达水平的比较35-36
• 3.4 各实验组肾脏组织中TNF m RNA表达水平的比较36-37
• 3.5 各实验组肾脏组织中CSF2 m RNA表达水平的比较37-38
• 3.6 各实验组肾脏组织中TLR4 m RNA表达水平的比较38-39
• 3.7 肾脏组织中TLR4 m RNA与IL-1a m RNA、IL-6 m RNA、TNF m RNA和CSF2 m RNA相关性分析39-47
• 第4章 讨论47-48
• 参考文献48-56
• 缩略语词汇表56-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间的研究成果58

【参考文献】

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1 陈向华;丹参酮配合电针对脊髓缺血再灌注损伤免疫细胞因子的调节作用[D];福建中医药大学;2012年

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本文编号：259585