雪旺细胞的分离、体外培养及纯化的实验研究

发布时间：2020-03-24 06:18

【摘要】：临床上导致周围神经缺损的原因很多，如肿瘤切除、创伤等均可造成神经缺损。临床上治疗周围神经离断除及时的神经对位缝合外，一般常用自体神经移植来治疗，但是存在造成供区神经功能丧失、遗留手术疤痕及供体有限、供区的附加切口、移植神经支配区的功能障碍等问题，且并不能保证达到确实的修复效果。近年来，周围神经组织工程技术的兴起，为神经缺损的修复提供了新的方法和手段。雪旺细胞(Schwann cell，SC)是周围神经系统的胶质细胞，在周围神经组织工程修复中充当种子细胞，但临床应用中来源有限，细胞增殖时间较长，限制了它的应用，因此快速获得组织工程化人工神经所需要的SC非常重要。目前国内外在此方面有较多的研究，但普遍存在着技术复杂、所需试剂昂贵、SC纯度不高等不足。为此，本试验采用分步法分离、培养雪旺细胞，Ara-C抑制成纤维细胞生长，并应用b-FGF刺激雪旺细胞的增殖，，对其生物特性进行研究，为其临床运用打下基础。目的：本实验采取SD乳鼠雪旺细胞(SC)作为周围神经组织工程的种子细胞，在体外分离培养，观察雪旺细胞在体外存活、生长情况，目的在于改进雪旺细胞的体外培养条件，寻找一种较好的获取雪旺细胞的方法，以获得足够数量的较纯净的雪旺细胞，为组织工程化的人工神经在临床的应用打下基础。方法：取SD乳鼠坐骨神经及臂丛神经，剪碎至1mm的植块，复合酶消化后进行组织块培养，Ara-C抑制成纤维细胞生长，b-FGF刺激SC增殖，低浓度胰酶快速消化传代进一步纯化雪旺细胞，采用细胞形态学观察、生长曲线测定、S-100蛋白鉴定。培养1、3、5、7天后，相差显微镜下观察SC的生长情况及其形态。结果：1、经上述方法分离获取了较高纯度的SC，保持了细胞的活性；2、Ara-C对成纤维细胞的生长有抑制作用，但对雪旺细胞的生长影响较小；3、一定浓度的b一FGF，可促进SC的增殖。结论:1、SD乳鼠坐骨神经和臂丛神经中分离培养SC来源确实、取材方便，可作为周围神经组织工程实验研究的细胞来源。2、联合采用复合酶消化、组织块培养、Ara一C抑制成纤维细胞生长、b一FGF促进雪旺细胞增殖是一种较经济、简便、实用的方法，可获得较高纯度的雪旺细胞。3、雪旺细胞体外培养过程中，Ara一C能较有效地抑制成纤维细胞的生长，b一FGF对SC有一定的增殖作用，能促进SC细胞在体外条件下增殖，有可能满足SC作为种子细胞在PN组织工程中应写的需求。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329.2

【参考文献】