重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗（rHp）剂型及免疫途径的实验研究

发布时间：2020-03-24 12:06

【摘要】： 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是定植于人胃粘膜的重要致病菌，全球感染率高达50％以上，与慢性胃炎、胃十二指肠溃疡及胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生、发展密切相关，1994年世界卫生组织(WHO)将幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌因子。药物治疗Hp存在较大的局限性(药物毒副作用、费用昂贵、患者依从性差及耐药菌株不断增多等)，而疫苗接种可使人群获得持久、有效的免疫力，是从人群中消除Hp的有效措施之一。动物实验表明，重组尿素酶B亚单位(rUreB)辅以适当佐剂免疫动物后，不仅能够产生有效的保护性免疫反应，而且可清除体内已感染的Hp。幽门螺杆菌在粘膜部位感染机体，研究证实，Hp疫苗经粘膜途径接种能产生有效的保护性免疫应答，发挥预防、治疗Hp感染的作用。根据共同粘膜免疫系统(common mucosal immunity system，CMIS)理论，在一个粘膜部位接种可以在其它远距离粘膜部位产生免疫反应，胃、鼻腔、直肠均可作为粘膜接种的途径。鼻腔含有的蛋白水解酶较少，抗原不易被破坏，鼻腔免疫可以在多个粘膜部位产生sIgA反应，诱导与胃肠相关淋巴组织(GALT)形式上相似的粘膜免疫反应。直肠内无蛋白水解酶、环境温和，血管及淋巴丰富，直肠接种同样可在胃肠粘膜诱导免疫应答。然而，，鼻腔及直肠均为管腔通道，液体药物停留时间较短，生物利用度低，用生物黏附剂卡泊波(carbopol)制备的凝胶，具有粘度高、生物粘附性好的特点，能延长药物与粘膜的接触时间。目前，国内外对幽门螺杆菌疫苗的研究仅局限在口服免疫，剂型以溶液或微球为主，众所周知，液体疫苗口服后易受到胃内低pH及胃蛋白酶的破坏;微球虽然是疫苗载体研究的热点，但在制备过程中应用的有机溶剂及高温操作会破坏疫苗的完整性，降低免疫效果.W/o/W型复乳以油膜包裹药物，可以保护药物免受胃蛋白酶的破坏，并具有淋巴趋向性，而且制备条件温和，不影响药物的稳定性，适合作为蛋白类药物的口服剂型。本研究以rHP疫苗(含rUreB及佐剂LTB)为对象，研制了适合鼻腔、直肠及口服免疫的剂型，考察了rHP疫苗经鼻腔、直肠及口服接种后的免疫应答水平及保护效率，并探讨了免疫保护机制。疫苗凝胶的粘度系数为8050厘泊，常温放置6个月凝胶没有明显变化，抗原的性质不受卡伯波及粘膜吸收促进剂的影响，动物实验表明，与疫苗液体相比，疫苗凝胶鼻腔及直肠接种产生的免疫应答显著增强(p0.01)。疫苗复乳的包封率为98.3%，粒径主要分布于2~10 pm之间，集中于5一7pm，粘度为1432厘泊，体内分布实验显示，6h胃中的抗原浓度仍很高，肠系膜淋巴结中的放射量24h最高，与胃液作用0.5~6小时复乳中的抗原不受影响，口服免疫小鼠后明显提高了rHP疫苗的免疫应答水平。 rHP疫苗经鼻腔、直肠及口服免疫小鼠后，均在小鼠的血清、胃粘膜、小肠粘膜冲洗液中产生了较强的特异性免疫应答，并产生了明显的抗HP 的免疫保护。ELISPOT抗体分泌细胞测定表明，三种途径免疫均可在脾脏及PP结产生抗体分泌细胞，与特异性抗体的测定结果相对应，但不同途径存在差别。细胞因子的RT一PCR试验证实，小鼠感染后胃组织主要有INF- Y表达，无IL一4表达，表现为Thl反应，攻毒后未感染的免疫鼠胃组织中则表达IL一4，表现为ThZ反应。三种免疫途径中鼻腔免疫剂量最小(10p 留只)，其次为直肠免疫(25 pg/只)，复乳50 pg/只。结论: 1.制备了包裹效率高、稳定性好的rHP复乳，粒径大小适合抗原提呈细胞的摄取，复乳能保护抗原免受胃消化酶破坏，剂量小，免疫效率高。 2.制备了生物粘附性强、性质稳定的r乃少凝胶剂，鼻腔及直肠免疫后能明显提高粘膜部位的免疫应答。 3.鼻腔、直肠及口服免疫rHP疫苗均能诱导较强的粘膜免疫应答，产生明显的抗枷的免疫保护，三种途径均可作为rHP疫苗的免疫途径。诱导以枷感染诱导以Thl反应为主要特征的免疫应答，而rHP疫苗主要 ThZ反应为主要特征的保护性免疫应答。
【图文】：

脱氧胆酸钠,抗原

抗原与脱氧胆酸钠混合放置1个月后，未发生明显的降解，表明抗原不受脱氧胆酸钠的影响

细胞因子,小鼠

JJJJJIIIgA一As。’…:gG一scSSSPleennn51曰。。901\口SV图27不同途径免疫小鼠后Fig27ASClevelsinsPleenandPeyedl月笼rent5.RT一PCR检测小鼠胃和脾组枷攻毒前，PBS组及免疫组各组均表达IFN一Y。攻毒前，IL一免疫组中部分小鼠胃组织表达，脾脏IFN一Y及IL一4在攻击前后各123
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R392

【参考文献】