自然沉降速度法分选兔骨髓间充质干细胞

发布时间：2017-03-21 17:05

  本文关键词：自然沉降速度法分选兔骨髓间充质干细胞，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：在前期研究低渗结合自然沉降分选兔骨髓间充质干细胞的基础上,以工程学关于颗粒流体力学为指导,求出兔骨髓间充质干细胞在培养液中的沉降速度。通过自然沉降速度法分选及鉴定细胞,建立一个简单易行的分离、纯化、增殖间充质干细胞的方法。目的：探讨自然沉降速度法分选骨髓间充质干细胞的可行性。方法：密度梯度离心法确定兔骨髓间充质干细胞的密度区间(ρ1),扫描电镜测量出兔骨髓间充质干细胞的直径(d),液体密度计测算出培养液的密度(ρ2),黏度计测算出培养液的黏度(μ),选择合适的公式计算出骨髓间充质干细胞的沉降速度Vt。以此沉降速度从兔的骨髓细胞中分选兔骨髓间充质干细胞,体外培养并观察其增殖能力、细胞纯度、细胞分化潜能,同时测定兔骨髓间充质干细胞克隆集落形成率的,记录各组原代培养时间,通过统计学比较各组间的差异。结果：1、运用密度梯度离心法获得的贴壁生长的间充质干细胞细胞,细胞呈长梭形、鱼群状排列生长。第三代间充质干细胞经成骨诱导,21天后,VonKossa染色见黑色钙结节,AKP染色见呈紫蓝色的碱性磷酸酶及棕褐色或咖啡色颗粒,对照组两种染色均阴性；成脂诱导后21天Red oil染色见淡蓝色细胞核及橙红色脂滴,对照组染色阴性。电镜扫描细胞示直径为20.37±4.58 μm (17μm-28μm),推导出自然沉降速度为Vt=50-55mm/h。2、通过自然沉降速度发分选获得的间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形、鱼群状排列生长。细胞形态与梯度密度离心法获得的间充质干细胞相似。3、较之梯度密度离心法,自然沉降速度法分选的间充质干细胞生长曲线显示更强的增殖活力。细胞生长集落形成率：1.067g/ml组比1.070g/ml组比自然沉降速度法组为5.33±1.07比5.56±0.88比6.11±1.17(P=0.000)。原代细胞培养时间：1.067g/ml组比1.070g/m1组比自然沉降速度法组为14.93±1.20比14.89±0.91比7.64±0.82(P0.01)。4、与梯度密度离心法相似,自然沉降速度法分选获得的间充质干细胞成骨诱导21天后Von Kossa染色见黑色钙结节,AKP染色见呈紫蓝色的碱性磷酸酶及棕褐色或咖啡色颗粒,成脂诱导21天后Red oil染色见淡蓝色细胞核及橙红色脂滴。对照组染色均阴性。结论：1、通过电镜测量得出兔骨髓间充质干细胞的直径约为d=(20.37±4.58) μm.进一步确定兔骨髓间充质干细胞在培养液中的沉降速度Vt=50-55mm/h。2、通过自然速度沉降法可成功从兔骨髓组织中分选出骨髓间充质干细胞,分选出的骨髓间充质干细胞原代培养呈成纤维样集落生长,经特定的诱导后具有成骨、成脂的分化潜能。3、较密度梯度离心法,自然速度沉降法分离出的间充质干细胞具有原代培养时间短,细胞集落形成率高的特点。4、自然速度沉降法在间充质干细胞分选过程中不采取任何干预措施,也不添加任何分离介质,仅通过物理原理自然沉降,可能对细胞损伤小,可能使细胞原有的生物学特性得到保留。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 原代细胞 沉降速度 细胞分选
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 个人简历3-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 第一部分：兔骨髓间充质干细胞沉降速度的确定12-31
• 引言12-13
• 材料与方法13-19
• 1 动物和材料13-14
• 2 实验方法14-19
• 结果19-24
• 讨论24-28
• 结论28-29
• 参考文献29-31
• 第二部分：自然沉降法分离间充质干细胞31-55
• 引言31-33
• 材料和方法33-39
• 1 材料和试剂33
• 2 实验方法33-39
• 结果39-48
• 讨论48-51
• 结论51-52
• 参考文献52-55
• 附录55-56
• 第三部分 ：论文综述56-73
• 参考文献67-73
• 致谢73-74
• 攻读学位期间发表的学术论文74-86

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 舒赛男;魏来;方峰;王宇;;免疫磁珠分选系统在分离大鼠骨髓干细胞群中的应用[J];标记免疫分析与临床;2006年01期

2 张宏伟,郑玉梅;免疫磁珠性质及其应用[J];国外医学(免疫学分册);2000年01期

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4 牛微;杨f

本文编号：259976