抗HFRSV血凝素抗原3G1-McAb重链可变区的克

发布时间：2024-07-07 19:36

　　抗HFRSV血凝素抗原3G₁ McAb经体内、外研究证实该McAb具有高中和活性及高保护活性。为了企图将其应用于人体内进行特异治疗的目的，本文用基因工程技术，从分泌3G1-McAb的杂交瘤细胞系培养中分别提取基因组DNA和总RNA后反转录成cDNA。用2套引物进行PCR扩增McAb的V_H基因。一套引物设计有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点。引物中含有起始密码和终止密码，主要用于从基因组DNA中扩增3G1V_H基因，并在大肠杆菌中表达。一套引物设计有PstⅠ和BstE Ⅱ酶切位点，用于从3G1cDNA中扩增V_H基因，并以期在真核细胞表达鼠-人嵌合抗体。经过1～3轮的PCR扩增，每轮均扩增30个循环，2套引物经扩增均获得约350bp大小的PCR产物。分别将从DNA及cDNA得到的PCR产物克隆到pUC19和M13mp18／19载体中。得到的阳性重组克隆用双脱氧核苷酸链末端终止法，分别在双链重组pUC19及单链M13模板中进行了3G1VH基因的核苷酸序列分析。结果表明，两种途

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

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前言
文献回顾
    1.制备基因抗体的结构基础
    2.基因工程抗体的种类及特性
    3.基因工程抗体的构建及表达
    4.基因工程抗体的应用
    5.基因工程抗体的发展前景
第一部分：3G₁-McAb V_H DNA的克隆及序列分析
    材料与方法
        1.实验材料
        2.实验方法
    结果
    讨论
第二部分：3G₁-McAb V_H cDNA的克隆及序列分析
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    结果
    讨论
第三部分：3G₁ McAb V_H基因在大肠杆菌中的表达及初步鉴定
    材料和方法
        1.材料
        2.方法
    结果
    讨论
小结
参考文献
致谢



本文编号：4003672