多重耐药肺炎克雷伯菌同源性及其β-内酰胺酶基因型研究

发布时间：2020-03-25 21:50

【摘要】： 肺炎克雷伯菌是医院感染最常见的革兰阴性杆菌之一。且其在医院感染中常以耐药菌株为主，70年代，，主要流行庆大霉素耐药菌株，自83年在德国首次报道SHV-2型超广谱酶β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)以来，ESBLs在肺炎克雷伯菌中流行日益严重，世界各地均有报道，且有不断增加的趋势。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要是产生各种β-内酰胺酶，特别是ESBLs。这些酶的耐药基因往往被编码在分子量较大的质粒上，且这种质粒又可同时携带其它的耐药基因，造成肺炎克雷伯菌多重耐药，限制了抗菌药物在临床治疗中的选择。而且，这些质粒可在同种甚至不同种的细菌之间传播，极易造成医院感染的暴发流行，是临床防治非常棘手的问题。 本研究收集了我院2000年5～8月重症监护病房(ICU)临床分离的耐药谱相似的多重耐药肺炎克雷伯菌6株。采用浓度梯度法测定6株菌株对13种抗菌药物的最低抑菌浓度；脉冲场凝电泳(PFGE)分析其同源性；接合试验分析耐药基因传播机制；采用聚合酶链反应(PCR)扩增临床分离菌株及其相应接合子的耐药基因，设计引物扩增的耐药基因包括SHV-1、TEM-1、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-8组、CTX-M-9组、OXA-2组、OXA-10组及质粒介导AmpC酶FOX-1组。PCR扩增产物进行克隆测序，确定β-内酰胺酶基因型。采用等电聚焦电泳(Isoelectric Focus， 浙江大学2003届硕士学位论文 IEF）测定临床分离的菌株及接合子p－内酚胺酶等电点。并对新发现的CTX－M上2基 因进行原核表达，对表达重组菌进行ESBLS鉴定及表达蛋白的等电点测定。 结果显示6株临床分离的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药，耐药谱基本一致， 接合子耐药谱与原始菌相似。原始菌对亚胺培南高度敏感，对派拉西林／三陛巴坦。 头抱腑酮／舒巴坦和头抱毗肪的最低抑菌浓度（MIC）值增高。对其余检测的抗菌药 物高度耐药。但原始菌株加克拉维酸后，头抱他睫MIC仍3256ug／ml。6株肺炎克 雷伯菌的PFGE条带及位置一致。6株细菌的接合子均有等电点…IS）5．4，7．7，8刀， 8二和 8．4的条带，pI7．7的条带能被氯哇西林抑制，而其他条带则能被克拉维酸抑制。 PCR扩增接合子 TEM、SHV和 CTX－M－1基因呈阳性反应，克隆测序分别为 TEM－1。 SHV和一新型 p内酚胺酶 CTX－M－22。CTX－M－22基因的原核表达，重组菌为产 ESBLs菌株，表达蛋白的等电点约为8．4。 以上研究表明，6株临床分离的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药，而且其接 合子也有相似耐药谱；6株细菌的质粒携带多个p－内酚胺酶的耐药基因，包括TEMl。 SHV、新发现的 CTX型超广谱p－内酚胺酶 CTX－M22及有待进一步研究的质粒 介导的inpC酶；我院ICU病房由多重耐药肺炎克雷伯菌引起一次小的医院感染流 行。
【图文】：

图16株肺炎克雷伯菌的PFGE结果

2O00b10O0b500b250b图2TEMPCR产物电泳结果子量标记;1一6分别为kP52、kp94、冲128、kpl38、kpl4:产TEM一26菌株的PCR产物;8:阴性对照菌;9:HZOM12345678gM
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R378

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 周伟琳,陈亚岗,俞云松,余素飞,马亦林;超广谱β-内酰胺酶SHV-12编码基因的克隆及序列分析[J];中华传染病杂志;2001年05期

2 朱戌冬,徐英春,吴伟元,王辉,陈民钧;一种新CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及其临床意义[J];中华检验医学杂志;2001年04期

本文编号：2600494