风疹病毒E1融合蛋白原核表达克隆的构建与表达

发布时间：2020-03-25 16:01

【摘要】： 风疹病毒E1融合蛋白原核表达克隆的构建与表达 硕士研究生 卢 宁 研究生导师 王 斌 教授 青岛大学医学院九八级病原生物学专业 中文摘要 目的 构建风疹病毒E1膜蛋白的原核表达体系，研究制备用于风疹病毒（RV）血清学诊断的基因工程抗原。 方法 将风疹病毒标准株接种细胞BHK-21，提取病毒的RNA，通过RT-PCR扩增RV E1膜蛋白主要抗原决定簇区212-242位氨基酸的编码基因（nt 8886-8976），将此片段重组于原核融合蛋白表达载体pGEX 4T-2上，并转入宿主菌E. coli. DH5α中，经IPTG诱导表达谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白，表达产物经亲和层析纯化。纯化产物经Western-blot检测其抗原性。 结果 RV E1融合蛋白可在E. coli. DH5α中有效表达，表达产物经亲合层析纯化后可获得单一目的蛋白条带。Western-blot检测结果表明此蛋白可与11份RV IgM-阳性血清中8份（72.7%）发生结合反应，，而与6份阴性血清均不反应。 结论 在原核表达系统中有效表达了保留风疹病毒抗原性的融合蛋白，为制备RV重组抗原提供了方法学基础，并为进一步研制开发新型RV诊断试剂提供了有用的资料。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R373.11

【共引文献】

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本文编号：2600107