牛心肌肌钙蛋白T的分离纯化和单克隆抗体的制备

发布时间：2020-03-25 14:05

【摘要】： 本项实验为从牛心肌组织中通过氯化锂抽提，硫酸铵分级沉淀，离子交换层析提取并鉴定心肌肌钙蛋白T(cTnT)，在SDS-PAGE电泳上为一条区带，亚基分子量为37KD，经高效液相色谱分析为单一峰，氨基酸组成以疏水性氨基酸为主。 用上述纯化的cTnT免疫BALB/C小鼠，，取脾与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合，筛选和亚克隆后，获得了4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株：G1，G2，G3，G4。抗体类型均为IgG2b。经小鼠腹腔接种产生腹水，用ELISA法测定单克隆抗体腹水效价为1/10~5，培养上清液为1/10~2。经ELISA和免疫印迹分析证实这几株单抗仅与心肌肌钙蛋白T(cTnT)发生特异反应，可与来源于人心肌的cTnT发生交叉反应，但不与骨骼肌肌钙蛋白T(sTnT)发生反应。 CTnT分离纯化及单抗的制备，为今后心肌损伤的早期诊断及与骨骼肌损伤的鉴别诊断提供了重要手段。
【学位授予单位】：北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R392

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