溶血磷脂酸对体外培养星形胶质细胞增殖和血脑屏障模型通透性影响及其机制研究

发布时间：2020-03-30 14:01

【摘要】： 目的了解溶血磷脂酸(LPA)对体外星形胶质细胞(AS)增殖和血脑屏障(BBB)模型通透性改变的影响，并探讨其可能机制。 方法1、AS随机分为空白对照组、小剂量二辛烷甘油焦磷酸盐(DGPP)组、大剂量DGPP组、百日咳毒素(PTX)组、LPA组、大剂量DGPP+LPA组、小剂量DGPP+LPA组和PTX+LPA组；MTT和流式细胞仪(FCM)检测AS增殖，鬼笔环肽(Phalloidin)检测AS胞内F-actin变化；2、为探讨LPA促AS增殖机制，将AS随机分为空白对照组、Ro31-8220组、佛波脂(PMA)组、LPA组、Ro31-8220+PMA组和Ro31-8220+LPA组；同前法检测AS增殖和细胞内F-actin变化，Fura-2／AM检测细胞内钙离子浓度，Western Blot检测AS内蛋白激酶C-α(PKC-α)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达；3、为了解LPA对血脑屏障(BBB)通透性影响，将体外培养的BBB模型分为空白对照组、LPA组和Ro31-8220+LPA组；γ计数仪检测BBB模型对~(125)Ⅰ-牛血清白蛋白(~(125)Ⅰ-BSA)的通过率，电子显微镜观察血脑屏障-紧密连接(BBB-TJ)改变，Phalloidin检测F-actin变化，FCM检测PKC-α阳性细胞比例，Western Blot检测BBB-TJ内claudin-5表达。 结果1、LPA可使AS存活率以及S期细胞比例增加，，AS形态改变，且以10μmol／L浓度LPA效果最佳；2、DGPP和PTX预处理可降低AS存活率以及S期细胞比例，与LPA组比较有统计学差异(P＜0.01)，但大剂量DGPP+LPA组较小剂量DGPP+LPA组抑制作用明显(P＜0.01)；3、LPA促使AS内[Ca~(2+)]_i浓度、PKC-α以及HIF-1α表达增加，与空白对照组比较有统计学差异(P＜0.01)；Ro31-8220+LPA组除HIF-α表达仍增加外，[Ca~(2+)]_i浓度和PKC-α表达均减少，与LPA组比较有统计学差异(P＜0.01)；4、LPA可使BBB模型~(125)Ⅰ-BSA通过率和PKC-α表达增加，claudin-5表达减少，与空白对照组比较有统计学差异(P＜0.01)，同时LPA使BBB-TJ开放，细胞内F-actin重组；而Ro31-8220预处理后，LPA的上述能力均有所减弱。 结论1、LPA经LPA_(1/3)-G_(i/o)蛋白偶联受体促进AS增殖和形态改变，其机制可能与PKC-α／Ca~(2+)信号途径以及HIF-1α相关；2、LPA可促进BBB-TJ开放，增加BBB通透性，其机制可能与PKC-α信号途径激活进而促使claudin-5表达下调以及F-actin重组有关。
【图文】：

一H工F一la蛋白表达光密度值图1一2一4WesternBlot显示各组HIF一la

附圈1·l-2附图1一2-1附图1·2一2附图卜l币附圈1一2一3附图卜2-4空白对照组，Ro31一8220组细胞排列紧密相互融合成胶状 (x300)，与空白对照组比较无明显变化 (x300)PMA组，细胞明显回缩圆化、触角形成，细胞间隙增宽LPA组，细胞回缩、触角形成，细胞间隙增宽 (x300)Ro31一8220+PMA组，变形细胞数目减少，变形程度减弱Ro31一8220十L队组，变形细胞数目减少，变形程度减弱( x300) x300) x300)
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R363

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本文编号：2607636