纳米颗粒免疫刺激作用的初步研究

发布时间：2020-03-31 04:46

【摘要】：细胞免疫是机体抗肿瘤最主要的方式。细胞免疫主要由Th1细胞及其细胞因子负责。但是在肿瘤进行生长时间，肿瘤细胞直接或间接抑制特异T细胞功能，导致Th1细胞功能低下。因此，要获得有效的抗肿瘤效应，活化Th1细胞是一个重要途径。如何增强人体的Th1免疫细胞因子的产生，是肿瘤生物治疗的关键。长期的实验研究和临床观察发现磨损颗粒可激活巨噬细胞产生细胞因子，如IL-1、IL-6、TNF-α等，其磨损颗粒大小一般为0.5-300μm。现行研究的免疫佐剂中，纳米级佐剂-抗原复合物，都能很好的引起细胞免疫反应。如果，用无毒的、可降解的纳米级颗粒刺激免疫细胞必将产生一些细胞因子，将对肿瘤细胞有一定的免疫治疗作用。 目的 探讨可降解与不可降解的纳米级颗粒是否能刺激Balb/C小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞增殖及是否促使其分泌IL-2及IFN-α。 材料与方法 实验细胞用小牛血清浓度为10%的以IMDM培养液调成5×106/ml的Balb/c小鼠脾细胞悬液与用Ficoll分层离心法从年轻、健康女性的外周血分离的细胞浓度为1×106/ml的人单个核细胞悬液。 用不可降解的100nm、200nm左右的聚苯乙烯微球、10μm左右的二氧化硅颗粒、可降解的50nm左右壳聚糖或100nm左右的壳寡糖颗粒与Balb/c小鼠脾细胞或人外周血单个核细胞在37℃ 5% CO2饱和湿度条件下共同孵育24小时、48小时。24小时后用CTLL-2细胞株或细胞病变抑制法检测上清溶液中的白细胞介素-2（IL-2）和α干扰素（IFN-α）及含量。48小时后用MTT法或3H～TdR掺入法检测纳米级颗粒对Balb/c小鼠脾细胞或人单个 WP=39 核细胞的促增值作用。 结果 200nm左右的聚苯乙烯微球浓度在40.625 ~325μg/ml时；100nm 左右的聚苯乙烯微球浓度在40.625 ~162.5μg时对Balb/c小鼠脾细胞及人单个核细胞有促增殖作用(P ＜0.05），并浓度各在162.5μg/ml、 81.25μg/ml时促增殖作用最明显(P ＜0.01）。并产生IL-2及IFN-α，与促细胞增殖程度相符；可降解的50nm左右的壳聚糖在1.25~40μg/ml时；100nm左右的的壳寡糖颗粒在1.25~20μg/ml时对Balb/c小鼠脾细胞及人单个核细胞有促增殖作用(P ＜0.05），浓度均在2.5μg/m时促增殖作用最明显 (P ＜0.01)，并产生IL-2及IFN-α，其含量与促细胞增殖程度相符。10μm左右的二氧化硅颗粒在任何浓度下对小鼠脾细胞无增值作用。 结论 纳米级颗粒对Balb/c小鼠脾细胞及人外周血单个核细胞促增殖作用；纳米级颗粒刺激人外周血单个核细胞，促使其分泌细胞因子IL-2及IFN-α；纳米级颗粒可以刺激免疫细胞，引起Th1细胞免疫，这将在抗肿瘤的治疗中发挥关键的作用。
【图文】：

搅拌速度200～300 r/min. 在75 ℃的水浴中,反应24h后,得到稳定的表面富集季胺盐的交联聚苯乙烯微球的乳液. 利用离心,再分散和渗析等方法纯化聚苯乙烯微球。表征为如图1TEM图象所示直径各为200nm左右、100nm左右，且聚苯乙烯颗粒呈较均匀的球形且表面光滑.并已单分子的形式均匀的分散在溶液中[18]。先用D-Hank，s液配成50mg/ml，高温、高压消毒， 4℃保存，用前稀释。由吉林大学超分子结构与材料教育部重点实验室提供2、二氧化硅颗粒：不可降解的二氧化硅颗粒直径在 10μm 左右，，先用D-Hank，s 液配成 10mg/ml，高温、高压消毒， 4℃保存，用前稀释。吉林大学超分子结构与材料教育部重点实验室提供

吉林大学硕士学位论文 纳米颗粒免疫刺激作用的初步研究3、壳聚糖颗粒 ：壳聚糖是由N-乙酰氨基葡萄糖聚合而成的多糖-甲壳质经脱乙酰化处理后得到。如图2所示其直径在50nm左右，表面光滑，呈球形，先用D-Hank，s液配成25.6mg/ml，高温、高压消毒， 4℃保存，用前稀释。壳聚糖具有多种生物活性，具有生物相容性好，可被体内多种酶类降解，降解产物完全无毒，并能被生物体完全吸收，有很强的免疫调节及抗肿瘤作用[18、19]。济南海得贝海洋生物有限公司提供。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

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本文编号：2608585