小鼠PDIP1基因的克隆及功能研究

发布时间：2020-03-31 06:07

【摘要】： PDIP1(polymerase delta-interacting protein 1)基因是在人HepG2细胞中克隆的一个基因。初步证实了PDIP1基因能与DNA聚合酶δ的小亚基p50和辅助蛋白PCNA相互作用。因此推测，PDIP1蛋白可能部分协助或参与DNA的复制和修复。此外，通过BLAST检索发现PDIP1蛋白与一个受TNF-α诱导的蛋白质B12十分相似，彼此的氨基酸序列高达70％是相同的。因此，推测PDIP1蛋白质可能与之有相似的生物功能。TNF-α是由激活的巨噬细胞产生的细胞激活素，能诱导细胞凋亡，特别是对肿瘤细胞。而B12在细胞凋亡过程中也有一定的作用。因此，PDIP1可能在细胞凋亡中也起到一定的作用。TNF-α的另一个重要功能是在肝脏受伤后启动肝脏再生。因此PDIP1基因也可能在肝脏再生过程中有一定的功能。 为了进一步研究PDIP1基因对细胞凋亡、肝脏再生的作用，我们首先采用RACE PCR的方法克隆了小鼠PDIP1基因的cDNA全长。小鼠PDIP1基因cDNA全长为1677bp，编码329个氨基酸残基。通过生物信息学分析，我们得知小鼠PDIP1基因位于7号染色体的F3位点上，，可能是一个转录因子在细胞核内发挥生物功能。并且得知哺乳动物体内存在一个PDIP1基因家族，此家族至少含有三个基因，分别命名为PDIP1-α、PDIP1-β、PDIP1-γ。我们设计合适的探针，采用核酸酶保护反应等技术测定了PDIP1-α基因在肝脏部分切除后不同时间在小鼠肝脏中的表达，发现PDIP1-α基因在肝脏部分切除后表达增强，12小时表达最强，以后表达减弱。初步表明该基因对肝脏损伤后的修复与再生有关。
【图文】：

IPI基因序列(AF4O1315)检，发现有两个EST序列人的PDIPI基因高度同源。A高度同源，AA546545与人l一3)。而且Als49007和AA，推断两者位于同一基因上端序列设计两个基因特异引NA的5’末端，根据AA5465引物，用RacePCR扩增基二二=井二二三些毕全=二=千===二石二二二二二二共二二二二二30405O6O7O

以01190(dT)18和巢式引物GSP3一2为第二轮PCR引物，扩增出的小鼠PDIPI基因cDNA3’端，其产物经凝胶电泳显示获得一条大约60Obp的特异性条带(图1一4)。目的条带经测序得知，其序列长为605bp。以01190(dT)18和巢式引物GSPS一2为第二轮PCR引物，扩增出的小鼠PDIPI基因cDNAS’，其产物经凝胶电泳显示获得一条大约450bp的特异性条带(图1一5)。目的条带经测序得知，其序列长为470bp。油pp0艾1图1一4cDNA3’扩增产物l、2、3号泳道600bp处的特异性条带为。DNA3’扩增产物图1一scDNAS’扩增产物2、3号泳道45Obp处的特异性条带为cDNAS’扩增产物2.4cDNA全长序列的拼接根据测序得到的3’端和5’端序列，并结合AI849007和AA546545两个EST序列进行cDNA全长序列的拼接，获得小鼠PDIPI基因cDNA全长序列。检索NCBI的小鼠基因库，得知其为一新序列
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：Q78

【参考文献】

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1 汪思应,程洁,郑红,张平,张宝霆,许望翔,魏汉东,杨晓明;一株与大鼠肝细胞再生相关的新cDNA克隆[J];中国病理生理杂志;2002年06期

本文编号：2608682