sCD80-Linker-sCD40L融合基因腺病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2020-03-31 17:49

【摘要】：目的：构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。方法：在GenBank检索人CD80、CD40L及IL-12b基因编码序列，确定扩增区域，设计引物。以Trizol抽提人外周血单个核细胞总RNA，使用RT-PCR方法获得IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L等基因的编码序列，并分别克隆入T载体。重叠PCR构建sCD80-Linker-sCD40L融合基因，克隆入T载体。使用Stratagene公司AdEasy XL Adenoviral Vector System试剂盒构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。空斑实验检测病毒滴度，Westen blot测定蛋白表达。结果：经测序证实，正确克隆了人IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L编码序列，构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的T载体，并进一步构建了携带该融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。本实验病毒滴度为2×10~(10)cfu／ml。Westen blot表明该融合蛋白被正常表达。结论：成功构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体，可以进一步进行体内和体外转染实验。
【图文】：

天津医科大学硕士研究生论DLZ000(自上至下):2000、1000、750、500、2IL一12bsig编码序列:87bpsCD80编码序列:670bpIL一12bsig一sCD80编码序列:730bpsCD40L编码序列:479bpIL一12bsig一sCD8o一Linker一sCD4oL编码序列:1237bDL15000(自上至下):15000、10000、7500、5四、重组T载体酶切鉴定和重组Shuttle载体酶切

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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 刘晓平,区庆嘉,黄洪莲,王小宁;B7修饰的肝癌细胞疫苗对细胞因子产生的研究[J];中华肝胆外科杂志;2000年01期

2 袁爱力,张智翔,肖丽萍,侯淑琴;B_7基因转染治疗原发性肝癌的实验研究[J];中华内科杂志;1997年01期

本文编号：2609381