基因变构人类白细胞介素-2克隆和原核表达

发布时间：2020-04-02 21:24

【摘要】： ①目的：通过定点诱变的方法，构建基因变构IL-2(~(88)N→R)的重组克隆，并将其在原核系统中进行高效表达，为研究基因变构IL-2(~(88)N→R)的生物学活性奠定基础。②方法：从一名健康男子的扁桃体细胞中分离T细胞经PHA刺激活化后，提取细胞的RNA为模板，逆转录构建cDNA文库，经套式PCR扩增出编码IL-2的基因，插入T-A载体后获得编码天然IL-2的克隆，，核苷酸测序证实成功后，自行设计含有突变位点的引物，利用重组PCR技术，进行定点诱变构建基因变构IL-2(~(88)N→R)的重组克隆，DNA测序确认变构成功。将改构后的IL-2基因重组于原核pGEX-4T-2质粒上，转化宿主菌E．coli．DH5α中，经IPTG诱导后表达IL-2变构体，表达产物经SDS—PAGE电泳分析。③结果：获得了人类天然IL-2的编码基因克隆和基因变构IL-2的编码基因克隆，并将变构IL-2(~(88)N→R)在大肠杆菌中获得了高效表达。④结论：IL-2基因的成功定点变构及其在原核生物中获得稳定高效的表达，为进一步在真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型基因变构IL-2药物奠定基础。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R392

【参考文献】