人成骨蛋白-1成熟肽基因的克隆和序列分析、5’端修饰及其在大肠杆菌中的表达

发布时间：2020-04-03 04:17

【摘要】：成骨蛋白-1(OP-1)，亦即骨形成蛋白-7(BMP-7)，是TGF-β家族的成员之一，属于Dpp-Vg1亚家族，与BMP-5、-6、-8(OP-2)关系最为密切。OP-1的cDNA全长1878bp，ORF1296bp，编码431个氨基酸的多肽，以前体蛋白的形式分泌。包括N端的信号肽、中间的前肽、C端的成熟肽三部分，翻译后的前体需要进一步加工修饰，包括切掉信号肽和前肽。OP-1的成骨活性主要表现在其羧基端成熟肽部分，这与TGF-β家族成员具有很大的相似性，它们在成熟肽部分保持很高的同源性，尤其是在TGF-β结构域，7个半胱氨酸的位置是绝对保守的。成熟的OP-1具有诱导骨形成的作用，能够促进各种骨缺损的修复和牙周重建，OP-1也能促进修复性牙本质、牙骨质的形成，还对脑缺氧或缺血有神经保护作用，此外，OP-1还在胚胎发育中起着重要的调节作用，因此。具有十分乐观的临床前景。由于天然OP-1的缺乏和提取困难，基因工程重组人OP-1(rhOP-1)已成为满足其研究和临床需要的唯一可靠来源，目前国外对rhOP-1的理论研究和临床应用研究已相当深入，hOP-1的全长cDNA已在真核系统获得表达，但昂贵的成本和极低的表达量远不能满足需要。尽管大肠杆菌表达系统缺乏蛋白质的翻译后加工能力，并可能潜在地影响表达蛋白质的稳定性、抗原性、生物学活性等，但大肠杆菌表达系统所具有的低成本、高产量等优点则是其它体系无法比拟的，因此仍是目前最常用的外源基因表达系统，国外已见到用大肠杆菌表达OP-1突变体的个别报道。在我国，关于OP-1的研究尚未起步。为启动和促进我国对hOP-1的研究，本研究对中国人OP-1成熟肽基因进行了克隆、序列分析、5’端修饰和原核表达，并观察了rhOP-1对体外培养的牙髓细胞骨钙素和碱性磷酸酶的影响。 采用一步酸酚法从中国健康人胎盘组织中提取总RNA，用RT—PCR技术直接从胎盘cDNA单链库中扩增出中国人OP-1成熟肽基因
【图文】：

图2.2.2OP一l在CHO中表达的加工模式v()潜在糖基化位点;(。蹄基化核;(▲)完成的糖基化日本H血即叭等用杆状病毒表达系统，对非洲爪蟾的B侧P[一7、B恻P[一2、B恻P[一4进行了表达。他们构建了表达XB]班P一2、XB侧P[一4、XR随P一7的重组杆状病毒，分别感染昆虫细胞，用鼠的成骨细胞系MC3”一E1对昆虫细胞条件培养液进行检测，发现感染XB侧P[一2、XB侧P[一4重组病毒

3实验结果3.1中国人胎盘组织庄八A单链库的构建以中国健康妇女胎盘组织块(图3.1.1)中提取的总RNA(图3.1.2)中的n识NA为模板，以以90(dt);2一l:为引物按方法2.7逆转录合成dONA第一链，，将此逆转录的成八A单链库置一20℃保存。图3.1.2的
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1997
【分类号】：R346

【参考文献】

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1 马真胜;骨形态发生蛋白分子生物学研究现状[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);1995年01期

2 张郁,荫俊,史俊南,肖明振,陈建元,吴军正;人牙髓成纤维细胞等的体外培养、生长特性和鉴定[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1991年02期

3 陈文,付士红,徐展,梁国栋,史俊南,候云德;成骨蛋白-1成熟蛋白编码区cDNA克隆与序列分析[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1997年02期

本文编号：2612922