同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤机制的研究

发布时间：2020-04-05 15:58

【摘要】：研究背景与目的:同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是一种含硫氨基酸,体内不能合成,只能来源于蛋氨酸的分解代谢,在体内主要以蛋白结合形式存在。其生理作用主要是参与体内一碳单位的代谢。目前公认,体内Hcy浓度升高是导致心血管疾病的独立危险因素之一。因此,对同型半胱氨酸在各种心脑血管疾病发病机制中所发挥作用的深入研究具有重要的理论和应用价值。研究表明,Hcy对血管内皮细胞的损伤作用是其致病机制的始动因素。但Hcy内皮损伤机制的研究没有得出一个系统的有说服力的结论。本次研究的主要目的是利用蛋白质组学研究的理论和技术,对Hcy作用后的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的蛋白质表达谱进行观察和分析,寻找与Hcy作用相关的蛋白质改变,更全面的了解Hcy所引起的细胞内功能蛋白的变化,为Hcy致血管内皮损伤机制的研究提供新的数据。 材料与方法:运用流式细胞技术对Hcy作用后的HUVEC进行细胞凋亡检测;用凋亡相关基因芯片技术获得Hcy作用后的HUVEC凋亡相关基因表达谱,利用RT-PCR、Western Blot对其结果进行验证,全面分析Hcy诱导血管内皮细胞凋亡的信号通路;采用2DE-MS技术路线对Hcy作用下的HUVEC蛋白质表达谱进行研究,并运用生物信息学数据库对Hcy作用后发生改变的蛋白质进行功能分析和相互作用分析。
【图文】：

理后提取细胞总RNA，并进行凋亡相关基因芯片检测。芯片实验分两组，对照组(不加Hey)和实验组(4ommol/LHey)。运用Superarray的芯片检测试剂盒进行检测，并用透射式图象扫描仪采集原始图像(如图1一2所示)。然后用GEarryanaalyzer芯片分析软件进行结果分析。以管家基因灰度值为标准，进行所有各点的标准化，获得各点灰度值，结果如图1一3所示。Hyc作用后各凋亡相关基因表达水平改变如图1一4所示。经软件分析后，最终获得表达下调基因12个(详见表1一1)，，表达上调基因16个(详见表l一2)图l一2cDNA杂交后基因芯片扫描图a.对照组，b.实验组。由图可见，两张芯片上部分点的信号强度存在显著差异。第16页共148页

四川大学博十研究生学位论文b图1一3基因芯片灰度分析结果示意图a.对照组(omnjol/LHey)，b.实验组(40nunol/LHey)。图中所示为经标准化后的灰度值。第17页共148页
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R543

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