细胞因子、生长激素和培养基对体外培养的兔关节软骨细胞影响的实验研究

发布时间：2020-04-06 05:18

【摘要】：目的 探索IGF-1、TGFβ1、GH和培养基对体外培养的兔关节软骨细胞增殖和分化的影响。 方法 实验分两部分进行，第一部分首先将三月龄兔关节软骨细胞分别接种于含15％小牛血清的1640和F-12培养基中，然后镜下观察其贴壁时间和第1，2，3，4，5，6，，7，14和21天细胞计数，阿新蓝比色法定量检测两组细胞GAG的分泌，MASSON染色结合图像分析法半定量检测两组细胞胶原合成。 第二部分首先以不同浓度的IGF-1、TGF-β_1、GH和IGF-1+GH分别刺激第三代软骨细胞，一周后以MTT法检测各组细胞增殖率，同前方法检测GAG和胶原分泌量。然后，通过形态学的变化和组化染色观察软骨细胞在细胞因子作用下是否发生去分化，已发生去分化的细胞在细胞因子的作用下能否再分化。 最后，以配对t检验比较两种培养基对软骨细胞增殖和基质合成的影响；以单因素方差分析和x~2检验比较IGF-1、TGF-β_1、GH、IGF-1+GH对软骨细胞增殖和基质合成的影响。 结果 1 原代细胞在1640培养基中贴壁更早、生长较快；传代后两种培养基中软骨细胞增殖速度无区别，但1640组分泌基质功能更活跃。 南京医科大学硕士学位论文 2细胞因子和生长激素刺激兔关节软骨细胞增殖的最佳浓 度为:T6F 4ong/ml，IGF 1 OOng/ml，GH SOong/ml，IGF loong/ml+ GH soong/ml。JGF十GH组细胞增殖速度和基质分泌量提高最明 显，其次是IGf一1组，再次是丁GF一团组，GH组影响最小。 3 TGF、IGF一1能维持软骨细胞表型，减缓其去分化，TGF一印 还有刺激软骨细胞再分化作用。 结论 用1640培养基培养兔关节软骨细胞更合理，它更有利于原 代关节软骨细胞的存活和增殖。而使用适当浓度的细胞因子可明 显提高关节软骨细胞的增殖和合成分泌功能并维持其表型。GH 也能促进体外培养的关节软骨细胞增殖，且IGF和GH联用有协 同作用，能进一步提高细胞基质的合成。
【图文】：

南京医科大学硕士学位论文n型胶原的检测三代两组细胞Masson染色胶原均为阳性。组细胞接种片胶原染色的图像分析结果为:1640组平均面.35士10.00)emZ，F一12组平均面积(55.94士9.42)emZ(每个本总面积264.52cmZ)，行配对，检验两组细胞胶原染色面有显著性(t=4.7，尸<0.01)。1640组平均灰度(119.77士4.34)，组平均灰度(121.53士3.72)，行配对，检验两组细胞胶原染色度差异无显著性(t一0.6，p>0.05)。两组软骨细胞胶原染色比见图7、8:

(2)不同因子对去分化软骨细胞影响的实验结果:IGF一1、GH、IGF一卜GH组去分化细胞在培养两代后形态仍呈梭形为主(参见图2)，GAG染色阴性(图20)。TGF一pl组去分化细胞培养一周后细胞形态大部分恢复三角形和多边形为主，GAG染色阳性。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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本文编号：2616072