纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究

发布时间：2017-03-22 16:14

  本文关键词：纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：高纯度的IgG抗体在生物学检测、临床诊断和疾病治疗上有着广泛的应用,IgG抗体纯化的常用方法包括沉淀法和亲和层析色谱法。目前,利用ProteinA/G对抗体的Fc片段的特异性结合,通过亲和层析进行抗体纯化,是实验室和工业上应用最广泛的方法。然而,Protein A/G对抗体结合的亲和力和特异性尚有改善的余地。本研究基于抗原／抗体结合的高亲和力和高特异性,用人源抗体的Fc片段免疫动物,构建了驼源重链抗体可变区的噬菌体展示文库,利用噬菌体展示技术筛选出了针对人源抗体Fc片段高亲和力、高特异性的纳米抗体。将筛选出的纳米抗体进行大量表达和纯化,然后将其交联至琼脂糖基质上,用于抗体的亲和纯化。结果显示：与Protein A/G相比,anti-Fc纳米抗体具有更高的特异性,能够获得纯度更高的抗体。此外,本研究所获得的anti-Fc纳米抗体也可用于亲和纯化偶联抗体Fc片段的融合蛋白,这为此类的蛋白表达纯化提供了新的途径。
【关键词】：纳米抗体 抗体文库 噬菌体展示技术 亲和层析
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392.1
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-11
• 第一章 文献综述11-22
• 1.1. 抗体的分离纯化11-14
• 1.1.1. 沉淀法11-12
• 1.1.2. 色谱法12-14
• 1.2. 抗体技术及VHH纳米抗体概述14-22
• 1.2.1. 抗体技术发展概况14-15
• 1.2.2. 基因工程抗体15-18
• 1.2.3. VHH纳米抗体18-22
• 第二章 实验材料与方法22-42
• 2.1. 实验试剂和仪器22-26
• 2.1.1. 试剂22-25
• 2.1.2. 仪器25-26
• 2.2. 试验方法26-42
• 2.2.1. 动物免疫及免疫后血清分析26-27
• 2.2.2. 淋巴细胞的分离和RNA的提取27-28
• 2.2.3. 噬菌体展示纳米抗体文库的构建28-33
• 2.2.4. 噬菌体展示纳米抗体文库的筛选33-36
• 2.2.5. 纳米抗体的筛选36-38
• 2.2.6. 对获取抗人源抗体Fc片段纳米抗体功能分析38-42
• 第三章 实验结果与分析42-51
• 3.1. 免疫后动物血清分析42-43
• 3.2. 噬菌体展示纳米抗体文库的构建43-45
• 3.2.1. 从获取的cDNA中扩增出免疫球蛋白的重链可变区43
• 3.2.2. 噬菌体载体的酶切43-44
• 3.2.3. 噬菌体展示纳米抗体文库有效插入率和多样性的检测44-45
• 3.3. 针对人源抗体Fc片段纳米抗体的筛选45-51
• 3.3.1. 噬菌体展示纳米抗体文库的筛选45
• 3.3.2. 针对人源抗体Fc片段的特异性阳性克隆的筛选45-47
• 3.3.3. 针对人源抗体Fc片段的纳米抗体的诱导表达47
• 3.3.4. 诱导表达后纳米抗体的功能检测47-48
• 3.3.5. 利用人源抗体Fc片段的纳米抗体亲和层析纯化血清中的抗体48-49
• 3.3.6. 偶联人源抗体Fc片段的纳米抗体亲和层析柱回收率的分析49-51
• 结论51-52
• 讨论52-54
• 参考文献54-58
• 致谢58-59
• 作者简介59

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本文编号：261863