脂肪间充质干细胞移植对幼鼠食物过敏模型免疫干预作用

发布时间：2017-03-23 00:17

  本文关键词：脂肪间充质干细胞移植对幼鼠食物过敏模型免疫干预作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的1.以Balb/c小鼠脂肪组织体外分离脂肪间充质干细胞(Adipose Derived Stem Cells,ADSC)并做鉴定及培养;2.构建卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致Balb/c幼鼠食物过敏模型,并利用Luminex液相芯片技术检测其血清细胞因子表达;3.探讨在致敏前期和致敏后期脂肪间充质干细胞注射移植对Balb/c幼鼠食物过敏的免疫干预作用,并比较两组的疗效有何不同。方法取无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级别6周龄的Balb/c品系雄性小鼠,采用颈椎脱臼的方法处死小鼠,于超净工作台中无菌取小鼠附睾及其周围部位的脂肪组织,使用眼科剪将其剪成小碎块,然后加入Ⅰ型胶原酶消化,经过滤去除未消化组织,离心后接种,放入细胞培养箱培养,3-4代后得到纯度较高的ADSC,进行成脂、成骨诱导分化鉴定及CD44、CD29的表面抗体鉴定,鉴定后冻存以备移植使用。将32只3周龄Balb/c雌性小鼠随机分为4个组:空白对照组、过敏模型组,ADSC治疗组,ADSC预防组,每组8只。利用卵清蛋白(OVA)建立Balb/c幼鼠食物过敏动物模型,空白对照组给予等量生理盐水作为对照,ADSC治疗组在强化致敏后(即造模第15天)按每只小鼠给予1×106个细胞数进行细胞移植,ADSC预防组在第一次基础致敏时(即造模第1天)进行细胞移植,空白对照组及过敏模型组给予等量PBS作为对照。观察各组小鼠相关的症状并进行评分,最后一次激发致敏操作后处死小鼠,取空肠组织0.5cm做HE染色,观察不同分组小鼠病理有何改变,小鼠处死前摘眼球取血,利用Luminex技术检测血清中多种细胞因子的变化情况,检测小鼠食物过敏血清细胞因子表达情况,并比较ADSC治疗组及ADSC预防组的不同。结果1.体外成功分离了Balb/c小鼠的脂肪间充质干细胞;脂肪间充质干细胞经过成脂诱导培养基诱导约2周可出现脂肪滴,经过油红O染色可呈现红色;脂肪间充质干细胞经成骨诱导培养基诱导3周左右可出现钙结节,经过茜素红染色可呈现红色;ADSC阳性表达CD44(98.92%)、CD29(99.78%)。2.制备Balb/c幼鼠食物过敏模型。与空白对照组的小鼠相比,过敏模型组小鼠表现出比较显著的过敏症状和体征,过敏模型组小鼠的症状评分平均值(3.13±0.64)明显高于空白对照组(0.38±0.52)(P0.05);病理切片出现小肠绒毛水肿,大量淋巴细胞及嗜酸性粒细胞等炎细胞浸润,并且IFN-γ,作为血清中Th1特征性代表因子,其含量是降低的(P0.05);IL-4,作为Th2特征性代表因子,其含量是升高的(P0.05);过敏模型组其它细胞因子IL-5、IL-6、IL-17A、IL-22、IL-23、MCP-1与对照组相比含量均升高,变化均有统计学意义(P0.05),而IL-10、IL-13的含量与空白对照组对比也有所升高,但并没有统计学意义(P0.05)。3.与过敏模型组相比,ADSC治疗组过敏症状评分平均值明显降低(P0.05);病理切片肠绒毛相对完整,炎细胞浸润量较少,ADSC治疗组IFN-γ、IL-4含量变化也有统计学意义(P0.05),其中ADSC治疗组的IFN-γ含量是升高的,IL-4的含量是降低的;其它细胞因子IL-5、IL-6、IL-17A、IL-22、IL-23、MCP-1含量降低均有统计学意义(P0.05),而IL-10、IL-13含量变化同样无统计学意义(P0.05)。说明ADSC移植对幼鼠食物过敏具有免疫调节作用。4.ADSC预防组过敏症状评分较过敏模型组分低(P0.05),但高于ADSC治疗组;病理切片观察较过敏组有缓解,细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-22、IL-23含量升高有统计学意义(P0.05),其余指标变化无统计学意义(P0.05),说明ADSC治疗组、ADSC预防组都能改善小鼠过敏症状,而ADSC治疗组较ADSC预防组效果更好。结论1.以小鼠脂肪组织体外可以成功制备、分离培养ADSC;2.OVA可以建立3周龄Balb/c幼鼠食物过敏模型;3.在致敏前期或致敏后期进行ADSC移植对Balb/c幼鼠食物过敏均有免疫干预作用,可以降低食物过敏幼鼠的过敏症状评分,减轻肠粘膜过敏病理损伤程度,调高Th1细胞因子IFN-γ,调低Th2细胞因子IL-4等,对食物过敏幼鼠有免疫防治作用,致敏后期干细胞移植比致敏前期移植免疫调节效果更好。4.腹腔移植ADSC可以减轻OVA诱导的幼鼠食物过敏,其机制可能与ADSC对Th1、Th2、Th17、Th22的免疫调节有关。
【关键词】：食物过敏 脂肪间充质干细胞 调节作用 卵清蛋白 幼鼠
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.9;R-332
【目录】：

• 英文缩略词对照6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 1 引言13-16
• 2 材料与方法16-26
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 实验动物16-17
• 2.1.2 主要实验试剂17-18
• 2.1.3 主要实验仪器18-19
• 2.1.4 主要试剂配制19-20
• 2.2 方法20-26
• 2.2.1 脂肪间充质干细胞（ADSC）的分离培养与鉴定20-23
• 2.2.2 卵清蛋白（OVA）制备Balb/c幼鼠食物过敏模型23-24
• 2.2.3 ADSC移植到食物过敏模型幼鼠体内24
• 2.2.4 Balb/c幼鼠食物过敏症状评分标准24
• 2.2.5 小鼠空肠取材、HE染色及组织学观察24-25
• 2.2.6 小鼠取血并检测血清细胞因子25-26
• 2.3 统计学处理26
• 3 结果26-33
• 3.1 体外成功分离培养并鉴定ADSC26-28
• 3.1.1 小鼠ADSC的形态观察26-27
• 3.1.2 小鼠ADSC的鉴定27-28
• 3.2 OVA成功制备Balb/c幼鼠食物过敏模型28-33
• 3.2.1 食物过敏症状评分28-30
• 3.2.2 小鼠空肠组织学观察30-31
• 3.2.3 空白对照组和过敏模型组细胞因子含量检测31-32
• 3.2.4 ADSC治疗组和过敏模型组细胞因子含量检测32
• 3.2.5 ADSC预防组和过敏模型组细胞因子含量检测32-33
• 4 讨论33-37
• 4.1 脂肪间充质干细胞（ADSC）的分离培养与鉴定33-34
• 4.2 卵清蛋白（OVA）制备Balb/ c幼鼠食物过敏模型34-35
• 4.3 小鼠血清细胞因子的检测35-37
• 5 结论37-38
• 6 参考文献38-42
• 7 附录42-43
• 8 致谢43-44
• 9 综述44-51
• 参考文献49-51

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本文编号：262555