人类胚胎发育过程中胎儿肝脏脂代谢相关基因表达谱的研究

发布时间：2020-04-13 09:06

【摘要】： 目的 脂质是生物体内的一类重要物质，不仅参与能量的利用和储存，也是细胞膜的主要结构成分，同时还在体温的维持、神经冲动的传导等方面发挥重要的作用。体内的脂质和其他分子一样，处于活跃的代谢过程中，尤其在生命过程的特殊阶段—胚胎的发育过程中，脂质对胎儿的正常发育更加重要。为了维持旺盛的生长速率，胎儿需要比成人更多的脂质。然而，对于胚胎期胎儿脂质代谢的情况所知甚少，一般用母体血液或脐血中的一些生化指标作为评价标准，，这些指标不仅间接而且单一，不能全面、直接的反映胎儿脂代谢方面的情况。本研究以人胚肝脏为研究材科，用cDNA Microarray芯片结合实时荧光半定量PCR的方法，研究人类胚胎发育过程中肝脏脂代谢相关基因的表达谱，并对芯片中没有涉及到的重要的脂代谢相关基因进行检测，以此探讨人类胚胎发育过程中的脂代谢变化特点。方法 收集正常胎儿及成人肝脏标本，冷抽提法测量胎肝中的脂质成分。一步法抽提孕早期、孕晚期胎儿及成年期肝脏组织总RNA，取等量mRNA逆转录标记~(33)P，制成cDNA探针后与人类全基因cDNA Microarray芯片杂交，用相应软件分析杂交信号扫描结果。再用生物信息学的方法对杂交数据进行聚类分析，找出脂代谢相关基因的表达谱，并对其中有差异表达的基因用实时荧光半定量PCR方法进行验证。用实时荧光定量PCR检测胚胎发育期LDLR家族成员差异表达情况。结果 按照阳性标准，综合三张芯片的结果，在进入研究的7661条阳性基因共呈现出不同类型的9种表达趋势；对其中孕早期、孕晚期两张芯片进行进一步分析发现，确定与脂代谢相关的基因 南京医科大学硕士学位论文 共有135条，其中有差异表达门倍以上）的基因有28条，随着胎 龄增长，脂肪酸分解的相关基因呈现上调趋势，脂肪酸和胆固醇合成 的相关基因呈现下调趋势。检测9例胚肝组织的脂质含量，发现胆固 醇和甘油三酯水平随胎龄增长而逐渐下降。荧光定量PCR的方法检 删 LDL受体家族基因（LDLR、LRP）表达发现，这些基因呈现上调 趋势。结论 人类胚胎的发育是一个复杂的过程，许多基因参与其 中，脂质代谢在胚胎发育过程中发挥重要作用；胚胎肝脏的胆固醇和 甘油三酯的合成率及含量可能随着脂代谢受体的发育成熟而呈现下降 趋势。基因芯片结合荧光定量 PCR的方法成熟、方便，可以大规模 平行展现基因差异表达情况，有广泛的应用前景。
【图文】：

胎儿肝脏标本病理结果图

1、总RNA甲醛变性胶结果电泳条带清晰，285与185比值约为2:1，且无明显降解，表明所获总RNA质量符合要求(见图4)。285185图4:总RNA甲醛变性胶电泳图2、总RNA光密度浏定结果总RNAI:100稀释后的光密度检测结果显示:三例样品吸光度OD26。/OnZs。均>1.8，表明总RNA质量良好(见表3)。表3:总RNA光密度测定结果孕早期孕晚期OD26oOD28oOD32oOD23oOD26o/ODZsoRNA(ug/ml)Protein(mg/ml)成年期0.6710.3530.0080.4151.90326.90.052巧638744
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R321

【参考文献】

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1 桑国卫，翁黎驹，邵庆翔，杜明昆，吴学浙，卢玉兰，程利南;不同剂量米非司酮和米索前列醇终止早孕的临床研究[J];中华妇产科杂志;1994年12期

本文编号：2625839