小鼠成血-血管细胞发育初探

发布时间：2020-04-15 19:40

【摘要】： 小鼠胚胎早期卵黄囊和AGM区的造血发育显示了造血发生同血管形成密切相关。造血细胞和内皮细胞可能存在共同的前体细胞即成血-血管细胞(hemangiobalst)。ES细胞分化培养2.5-3.5天形成的拟胚体中可检测到blast集落形成细胞(blast colony-forming cell，BL-CFC)，后者具有造血和内皮双向分化潜能，体外证明了成血-血管细胞的存在。EBs来源BL-CFC检测成为研究成血-血管细胞的体外模型，为研究转录因子、细胞因子等造血调控因素在成血-血管细胞发育中的作用提供了有效的途径。本实验以建立的blast集落培养体系为基础，研究BL-CFC的造血和内皮分化潜能以及TGF-β_1对BL-CFC的产生和blast集落形成的影响。并对高增殖潜能集落形成细胞(high proliferative potential-colony forming cells，HPP-CFC)成血-血管活性进行了初步鉴定。 首先，应用CCE ES细胞系分化培养获得blast集落，巢式RT-PCR方法检测单个集落造血和内皮相关基因的表达，免疫荧光染色证明blast集落来源的贴壁细胞表达CD31、VE-Cadherin／CD144和UEA-I，并可特异性吞噬LDL，证明其为内皮细胞。造血集落培养检测blast集落细胞的造血分化能力，证明BL-CFC不仅可产生包括原始造血和永久造血的多种定向造血祖细胞，而且可产生HPP-CFC，更加丰富了BL-CFC作为成血-血管细胞的功能性定义。 在以上实验的基础上，blast集落培养的不同阶段施加外源性TGF-β_1及其中和抗体，研究TGF-β_1对BL-CFC的产生及其分化能力的影响。结果发现在EBs培养阶段加入TGF-β_1中和抗体EBs中BL-CFC的数量明显减少，而外源性TGF-β_1对BL-CFC的产生无显著影响。在blast集落培养阶段外源性TGF-β_1则明显抑制blast集落的形成。提示TGF-β_1对成血-血管细胞发育的调控作用在成血-血管细胞产生前后有着不同的调控方式和机理。 BL-CFC在培养2.5-4天的EBs中短暂出现后消失，随后HPP-CFC最早产 中文摘要 生于培养5天的EBs中，，BL一CFC消失后ES来源HPP一CFC，甚至胚胎造血细 胞来源的HPP一CFC是否会保持成血一血管细胞活性?回答此问题有助于了解成 血一血管细胞的发育、迁移和生长。我们取培养7天的EBs以及10dPc小鼠胚 胎卵黄囊和AGM区来源的HPP一CFC进行内皮细胞分化诱导和鉴定，结果表 明上述来源的部分HPP一CFC产生多向造血细胞的同时具有内皮分化能力，初 步证明HPP一CFC具有成血一血管细胞活性。
【图文】：

Ab一EBAnti·TGF一plantibodyAb一BL一Anti一TGF一p!antibody各组BL一CFC计数结果如表1一2和图1一7，T-EB组与正常组相比BL一CFC均数略高，t检验P=0.7109，无统计学差异。T-BL组与正常组相比BL一CFC明显降低，t检验P=0.0014，具有统计学意义。加入Anti一TGF一p;抗体后，Ab一EB组BL一CFC比正常组较低，t检验P=0.0058

单个HPP一CFC集落中造血和内皮相关基因mRNA水平的表达。EBS来源的HPP一cFc集落中2/4集落表达tie一2，1/4集落同时表达刀无~I和tie一2，所有集落均表达刀一maj’o;珠蛋白基因，2/4的集落同时表达内皮和造血相关基因(图2一3A)。10即。小鼠胚胎AGM区细胞来源的HPP一CFC集落中2/4集落表达刀无.1，所有的集落均表达AML一1和刀一major珠蛋白基因(图2一3B)。1OdP。小鼠胚胎YS细胞来源的HPP一CFC集落中3/4集落表达刀个了，1/4集落同时表达刀肛I和tie一2，3/4集落同时表达内皮和造血相关基因(图2一3C)。C1234皿一I心岌二翔..白tie-ZI曰.......AML一1已曰七二‘日.曰介majo;吐士竺望攫巡瞥，黑绷如rl‘二翔口:犷:2二口f矛Jr户r通了‘飞尸O厂，j月

本文编号：2628908