不同肿瘤细胞株三种糖基转移酶基因家族低密度表达谱基因芯片的初步研究

发布时间：2020-04-22 00:38

【摘要】：目的 研究采用低密度基因芯片对人不同肿瘤细胞中的糖基转移酶基因家族进行表达谱分析。方法 通过斑点杂交确立以膜为基础的分子杂交技术，以此为基础，建立N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族芯片，采用NBT和BCIP显色法与本室已有化学发光法结果比较其灵敏度差异及可行性，再通过TOPO-TA克隆、PCR、RT-PCR、分子标记和相应显影系统等技术对人不同肿瘤细胞中的硫酸基(磺基)转移酶、半乳糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶三个糖基转移酶基因家族进行表达谱分析。结果 成功地建立了以膜为基础的斑点杂交技术，并检测了不同肿瘤细胞株的pp-GalNAcT2的差异表达，再建立N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族芯片，发现NBT和BCIP显色法与化学发光法相比，其灵敏度不足以检出所有基因的表达差异，需采用灵敏度更高的显影或检测系统；但也进一步证实了pp-GalNAcT2和T4在不同肿瘤细胞株中均有相对高水平的表达，其表达与否可能与肿瘤的发生、发展密切相关。同时采用TOPO-TA克隆建立了糖基转移酶三个基因家族：硫酸基(磺基)转移酶、半乳糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的cDNA文库，并以此制成低密度表达谱基因芯片。通过此芯片采用化学发光法检测到不同人肿瘤细胞中相应的表达谱，结果表明：(一) 在不同肿瘤细胞中，除了SHG44和PC12等神经细胞未检出硫酸基(磺基)转移酶IGlcNAc6ST表达外，IGlcNAc6ST在其余几种肺癌、胃癌和白血病肿瘤细胞株中均有高水平的表达，其表达与否可能与肿瘤的发生、发展密切相关。(二) 在不同肿瘤细胞中硫酸基(磺基)转移酶、半乳糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶三个糖基转移酶基因家族的各个成员的表达水平不一。(三) 在同一肿瘤细胞中，硫酸基(磺基)转移酶、半乳糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶三个糖基转移酶基因家族内各个成员的表达也有差异。结论 在不同肿瘤细胞中，糖基转移酶基因家族表达谱有差异，其表达差异可能与肿瘤的发生、发展有着一定的相关性，特别是硫酸基(磺基)转移酶IGlcNAc6ST高水平表达更值得关注，，但它们之间具体的联系还需进一步的研究。
【图文】：

不同肿瘤细胞株三种糖基转移酶基因家族低密度表达谱基因芯片的初步研究第一部分表1:7901，NIH3T3，NB4，K562细胞斑点杂交扫描定量结果790119.9NIH3T3NB413.0K56229.015.410.45.工2.07.217.53.115.69.04.62.820.88.318.124.296.0O71.8119.8

图9:7901和K562细胞芯片扫描所得pp一GalNAc咒和T4相对表达水平直方图试剂盒检测了胃癌细胞SGC7901的表达谱，化学发光法灵敏度虽高，可需要在胶上显影，其最终结果受显影技术、显影时间等因素影响，操作相对烦琐，且不直观而NBT和BCIP显色法直接在膜上显影，操作简便，价格便宜，也具有较高的灵度，因此我们希望能用NBT和BCIP显色系统来代替化学发光系统，但实验结果得到两种表达水平最高的基因pp一GalNAcTZ和T4的表达谱，SGC7901细胞两者达结果与去年相一致，说明NBT和BCIP显色系统由于灵敏度的限制可能不能完
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2635924