实时定量PCR检测IgH基因重排的研究

发布时间：2020-04-24 12:26

【摘要】：目的 探讨用改良SYBR green Ⅰ实时定量PCR(RQ-PCR)技术，消除引物二聚体(PDs)对定量分析的影响，建立准确的定量检测DNA含量的方法。 方法 以β-actin为目的基因，通过对扩增产物和PDs熔解曲线的分析找出各自的解链温度(Tm)，选择在高于PDs Tm但低于目的片段Tm的温度时检测荧光信号，，建立改良SYBR green Ⅰ RQ-PCR方法。用此法构建了标准曲线，并检测了该法用于DNA定量的精确性和稳定性。 结果 该法可消除PDs对SYBR green Ⅰ实时定量PCR的影响。所得标准曲线斜率为-3.178866，相关系数为-0.980535，PCR反应动力学范围达5个log值(10~-10~6)；精确性检测中，DNA含量实测值与预测值的差异无显著性(P＞0.05)；稳定性检测中，三种不同浓度标本的批内变异和批间变异分别为1％、3％、2％和2％、4％、4％。 结论 改良SYBR green Ⅰ实时定量PCR可有效消除PDs对定量分析的影响，对目的基因DNA拷贝数进行PCR反应线性范围广、敏感性高、精确性佳、稳定性好的定量检测。是一种简便实用的DNA定量检测的方法。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【参考文献】

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本文编号：2638961