对JWA基因功能和结构的初步研究

发布时间：2020-04-24 22:39

【摘要】： JWA基因是周建伟等1998年发现和克隆的受维甲酸诱导的新基因，登录在NCBI基因库中的编号为AF070523。到目前为止，除我们实验室外尚未发现有其他学者对JWA基因进行系统研究的报道。 JWA基因cDNA包含2114个核苷酸，编码188个氨基酸，初步分析结果表明JWA在细胞体内的功能较为活跃。本研究的目的在于通过对JWA基因结构的分析，寻找研究JWA基因功能的切入点；同时建立检测JWA表达产物的方法，为研究JWA基因提供有力工具。应用聚合酶链式反应分析人基因组DNA，检测JWA基因中是否存在内含子。根据JWAcDNA序列，设计了多对能够扩增JWA基因不同片断的引物；分别以人基因组DNA和JWA cDNA为模板，交叉扩增JWA基因的不同片段序列。结果从两个模板扩增出的产物大小一致，初步表明JWA基因中不含有内含子。用分子克隆技术分别构建了含JWA启动子和大鼠JWA同源基因的重组体，经过测序获得JWA启动子621bp序列和大鼠JWA编码区序列。在启动子序列中含有佛波酯反应元件（TRE），应激反应元件、 Hemin、NFκB、热休克反应元件及ATRA反应元件的半位点（SRE），提示JWA基因表达可能受多种因素调节。进一步用TPA、全反式维甲酸、4HPR等诱导分化剂处理K562、NB4、NIH3T3三种细胞株和 M3型白血病人原代培养的白细胞，观察JWA在转录水平上的变化，结果发现：JWA表达对诱导分化剂的作用表现出相当活跃的变化； TPA和4HPR两种药物对JWA的表达调节方向与细胞株的性质有关；而M3型白血病细胞被ATRA诱导可能是其它诱导分化剂调节南京医科大学硕士中fi沦文 J帅表达的前提。尽管这些结果还不足以阐明 j帅基因的功能特点，懒示IWA基囚结构与功能之间存在看必然的联系，并为研究它的功s测一了方后和刻＊。将大鼠J帅编码区序列与人J帅基因比较，发现4个核替站相应4个氨基酸不同，推汉 JWA基因在大鼠和人的细胞中生物学功另可能相近。J帅在这两个跨度较大的种属中呆持了相寸稳定的 DN A序列，提示该基因在生物删匕过程中可h测呆守。为确定J帆表达严物在细胞内的冰；构建了J WAWA，以i厂荧光重纽体，利用基因转染4支术，将重组体整合入培养细胞的基因纽＊＊A中；使其在培养乡胞中稳定表达。In厂P荧允融合蛋白，在激光共聚焦显敝下间舢蔡J帅在细胞生活状态下的分抑青况。结果提示门WA蛋白分布在细胞浆内，在核膜边贼较多的聚集，对圭H脓形成刨莫状，这些者卜全月包胃架特别删管蛋白在5［0）泡内丙分布相｛，。运用机免疫吸附侧4支术，对制备的两株兔抗JWA多克降抗体进行了鉴定，，这两郴元体均有附的剂量朋关系，在1：1（北们勺能与抗原颇并达到＃钞于的和b腹。采用W匕匕111 net方法，S红卯不同来源细胞中 JWA表达产物，结果在人源性、鼠源性细胞蛋白叫V 有特异性蛋白条带出现，其大小与预测的JWA蛋白肝量一致，丁以确定这个条带就是J叭表达产物Z 用抗J帅抗体对多种肿瘤组织进jyffo疫绷b 红保讨了JWA蛋白表达与肿瘤的关系。揪寸以上实验结果，｛峨什J从多方面初步了解了J帅基因的基木结构和功能。近期课题组又在研冗J帅基因参与细胞分化和凋亡小Z 节、辆细H腋激反应调节等方面取得了有意义的研究成果，为进一步全面阐明J帅基固的生物学功S删了有价值的邯卜
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R346

【参考文献】