Gas7在大鼠隔区发育过程中的表达

发布时间：2017-03-23 15:20

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【摘要】：目的:研究大鼠发育过程中,隔区生长休止蛋白7(Growth arrest-specific protein7,Gas7)的表达,探讨Gas7在大鼠隔区发育过程中可能的生物学功能,为大鼠隔区的发生发育提供可能的分子生物学资料。方法:成年SD大鼠60只,雌雄各半,将雌雄大鼠于当日18:00时按1:1合笼,次日中午检测有阴栓者,定为胚胎期第0.5天(E0.5)。根据大鼠隔区发生和发育的特点,选取E16.5、E20.5、P0(出生当天)、P7、P14、P21和Adult(2月龄)共7组不同发育时期大鼠,每组随机选取18只,共126只大鼠用于实验;其中每组分别取6只大鼠,应用RT-PCR方法、Western blot方法和免疫组织化学方法观察发育不同阶段大鼠隔区Gas7的表达及定位。结果:1.RT-PCR实验结果:在E16.5时Gas7表达最弱,其后逐渐增强,至P21时达到高峰,Adult又有所减弱。2.Western blot实验结果:Gas7蛋白表达趋势与RT-PCR实验结果相同。3.免疫组化实验结果:○1外侧隔核(LS):在E16.5、E20.5和P0时均未见典型形态的阳性神经元,Gas7阳性产物呈絮状或斑片状,P7时出现阳性神经元,由P7至P21阳性神经元数量逐步递增,且相邻时间点间有显著差异(P0.05),成年较P21细胞数减少(P0.05);由E16.5至P21染色逐渐加深、平均灰度值逐渐减小,相邻时间点间差异显著(P0.05)。○2内侧隔核(MS):在E16.5和E20.5时Gas7免疫阳性产物呈絮状或斑片状,Gas7阳性神经元出现于P0,此后,其细胞数量递增和平均灰度值递减的趋势与LS相同。○3斜角带核(DB):斜角带核水平支(HDB)阳性神经元出现的时间,数量和平均灰度值的变化趋势与MS一致;斜角带核垂直支(VDB)阳性神经元自P0出现后逐步递增,至P14达到高峰,P21和成年均有所减少,平均灰度值由E16.5开始递减,至P14达到最低,随后又逐步升高,相邻时间点间均有显著差异(P0.05)。提示Gas7可能参与了隔区大部分发育过程的调节。○4伞隔核(SFI)和三角隔核(TS):由E16.5至成年,均不见具有典型形态的Gas7阳性神经元。结论:1.在大鼠隔区发育的过程中,Gas7基因核酸和蛋白的表达具有时间和空间上的特异性,这种特异性与隔区神经元的发育和成熟相关,提示Gas7可能参与了大鼠隔区亚细胞核团的发育过程。2.Gas7阳性神经元在隔区大部分核团出现的时间不一致,数量和平均灰度值到达高峰和低谷的时间点不同。这种表达上的差异可能与隔区亚细胞核团本身的发育特点有关,同时也说明Gas7对隔区不同核团的发育,其调控作用可能不同。3.LS、MS和DB与认知和记忆相关,SFI和TS与情绪及疼痛有关。结合各核团Gas7免疫组化结果推测,Gas7在参与隔区各核团发育的过程中,可能主要调节具有认知和记忆功能的部分核团,提示Gas7可能对大鼠隔区认知和记忆功能的形成有影响。
【关键词】：生长休止蛋白7 发育 隔区 大鼠 免疫印迹 逆转录聚合酶链反应 免疫组化
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 研究内容与方法13-29
• 1 实验材料13-16
• 1.1 实验动物13
• 1.2 实验仪器13-14
• 1.3 实验试剂14-16
• 2 实验方法16-28
• 2.1 标本收集16-17
• 2.2 RT-PCR方法检测各时期隔区Gas7 mRNA的表达17-21
• 2.3 Western blot检测各时期隔区Gas7蛋白的表达21-26
• 2.4 尼氏染色和免疫组织化学染色观察Gas7蛋白在不同时期隔区的组织学定位26-28
• 3 统计处理与分析28
• 4 实验技术路线图28-29
• 结果29-40
• 1 RT-PCR方法检测各时期隔区Gas7 mRNA的表达29-31
• 1.1 各组不同时期大鼠隔区RNA的质量检测29
• 1.2 RT-PCR结果29-31
• 2 Western blot方法检测各时期隔区Gas7蛋白的表达31-33
• 3 Gas7蛋白在大鼠隔区不同发育时期中的组织学定位33-40
• 3.1 Nissl染色结果33-34
• 3.2 Gas7免疫组织化学染色结果34-40
• 讨论40-46
• 1 隔区各核团的发育40-42
• 2 Gas7在隔区各核团发育过程中的表达及其生物学功能42-46
• 结论46-47
• 参考文献47-53
• 综述53-66
• 参考文献60-66
• 附录66-87
• 作者简介（学习及工作经历、发表的学位文章）87-88
• 致谢88

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本文编号：264030