大鼠精原细胞分离纯化及双酚A对其活力和结构的影响

发布时间：2020-04-26 03:17

【摘要】：目的 探讨大鼠精原细胞的分离纯化及双酚A对精原细胞活力和结构的影响。方法 三种酶两步消化法制备10dWister大鼠睾丸的单细胞悬液;Percoll不连续密度梯度分离精原细胞;用贴壁速度的差异纯化精原细胞。光电镜观察精原细胞的形态结构特征;应用c-kit免疫细胞化学鉴定精原细胞。苔盼蓝计数法探讨不同剂量组双酚A(1×10~(-4)mol/L、1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)对离体培养精原细胞活力的影响;吉姆莎染色观察不同剂量组双酚A对离体培养精原细胞形态结构的改变。结果 精原细胞主要分布于28%～36%(Ⅱ带)间的Percoll梯度;分离纯化的精原细胞形态结构与组织切片上精原细胞的形态结构一致,其纯度达55.68%;c-kit在精原细胞呈阳性表达,在睾丸其他细胞呈弱阳性或阴性表达。双酚A可降低离体培养精原细胞活力,增加精原细胞核固缩数量,改变精原细胞的形态结构。结论 利用三种酶两步消化法、Percoll不连续密度梯度及体外培养贴壁速度的差异分离纯化的精原细胞满足体外实验要求;精原细胞表达特异的c-kit受体。双酚A对精原细胞有直接的细胞毒性作用。
【图文】：

时间(天)图4随着时间的延长各剂量组对离体培养精原细胞活力的影响结果表明:随着时间的延长，各剂量组均可降低离体培养精原细活力:与正常对照组比较，双酚A各剂量组随剂量增加，对离体培原细胞活力影响越大。

离体培养的精原细胞散在或成堆成串:单个精原细胞胞体大，圆形;胞质少;核大成圆形，可见1一3个核仁;存在凋亡细胞离体培养的精原细胞成堆成串或散在;单个精原细胞胞体大圆形，胞质少，核大圆形或椭圆形，可见1~3个核仁;凋亡细胞少。图16双酚A(低剂量)组(Giemsa)10X100离体培养的精原细胞散在或成串成堆;部分细胞可见细胞间桥;多数细胞形态同正常对照组;少部分细胞胞体缩小，核固缩，核仁不明显。图17双酚A(中剂量)组(Giemsa)10X100离体培养的精原细胞散在或成堆成串，形态同正常对照组;部分细胞胞体缩小，胞膜皱缩，核固缩，核仁不明显;部分细胞胞浆内可见嗜碱性颗粒。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329.2

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本文编号：2641023