一氧化氮在新生大鼠离体延髓脑片标本上对节律性呼吸的调节作用

发布时间：2020-04-29 01:10

【摘要】： 目的 1)应用新生大鼠离体延髓脑片标本，记录与之相连的舌下神经呼吸节律性放电(respiratory rhythmical discharge activity，RRDA)，在灌流液中分别给予不同浓度的NO(nitric oxide，NO)供体硝普钠(sodium nitropmsside，SNP)，NO合成前体L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)以及神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)特异性抑制剂7-nitro indazole (7-NI)，观察其对RRDA的影响，从而探讨NO对节律性呼吸的产生和调节中的作用；2)在新生大鼠离体延髓脑片标本上，同步记录舌下神经根和面神经后核内侧区(the medial area of retrofacialis nucleus，mNRF)中的吸气神经元的放电活动，分别给以NO的合成前体、供体以及nNOS的特异性抑制剂，进一步探讨NO对节律性呼吸产生影响的可能机制。方法选用新生SD大鼠(0～3d)，雌雄不拘。1)参照并改良Suzue的方法制作离体延髓脑片标本，主要包含面神经后核内侧区，前包钦格氏复合体(Pre-B(?)tzinger Complex)、腹侧呼吸组以及背侧呼吸组的一部分，保留舌下神经根。用玻璃吸附电极记录舌下神经放电作为呼吸活动的指标，主要的呼吸参数包括呼吸周期(respiratory cycle，RC)、吸气时程(inspiratory time，TI)、呼气时程(expiratory time，TE)以及放电的积分幅度(integral amplitude，IA)，通过灌流液给药，观察不同浓度的不同药物对神经根放电活动的影响；2)在面神经后核内侧区(mNRF)同步记录吸气神经元单位的放电活动，灌流给予上述不同药物药物，观察其对吸气神经元放电的影响。结果 1在记录神经根的实验部分：1)灌流给予不同浓度的NO合成前体L-Arg(从500μmol/L到2mmol/L)，与给药前对照相比，舌下神经根的各项放电指标均未出现显著性变化;2)灌流给予不同浓度的NO 供体sNP(浓度100脚。UL~2~1几)，不论给予上述任何浓度的SNP，舌下神经根放电指标与对照相比都未出现明显变化;3)灌流给予不同浓度的nNOs的特异性抑制剂7一I(500娜ol/L~2~ol几)后，Rc、TE 无显著性变化，而随着给药时间的逐渐延长，TI和IA均同时出现逐渐的下降的趋势:500娜。比7一I实验组，正常MKS液灌流时TI为1.39 士0.055、I^为1387.00士65.16林V·ms，给药后第smin时Tl为1.01士 0 .055、I^为1274.00士55.82”V·ms(p0.05)，第10min时TI为0.89士 0.055、IA为1218.00士55.34衅·ms(p0 .05);lmmo比的7一I实验组，正常对照组Tl为1.01士0.185、IA为1642.83士226.90四.ms，给药后 Slnin，Tl为0.87士 0.145、认为1528.43士189.02四·ms(P0 .05)，10rliln 时，Tl为0 .37士0.125、IA为1278.83士180.92四.ms(P0 .05);Znnno讥 7一I实验组，，正常对照的TI为1.17士0.065、IA为1356.00士65.16四·ms，给药后smin时，Tl为0.87士0.055、IA为1190.00士57.82衅.ms(P0 .05)，给药10min时，Tl为0.32士0.035、IA为966.00士58.34四.ms(’I’0 .05)。 7一I的浓度和这种抑制作用还存在量效关系，10min时，给予500洲mo比 Tl下降约36%，IA下降12%，Inuno比时TI下降63%，IA下降22%， 2~泥时Tl下降73%，IA下降28%;4)单纯给予相应浓度的7一I 溶剂二甲亚矾(d如ethyl sulfoxide，DMSO)后，舌下神经根放电活动无显著性变化。 2同步记录舌下神经根和mNRF区吸气神经元放电活动的实验:l)给药前，正常MKS灌流时，吸气神经元放电的平均频率为 25.39士5.04次HZ，放电时程为0.5811士0.02975;2)先后分别给予L一A飞、 SNP之后，吸气神经元放电的平均频率分别为26.79士5.llHz和 26.43土5.02Hz，放电时程分别为0.5733士0.02535和0.5628士0.02655，与对照相比平均频率和放电时程并无显著性变化(卜0.05);3)给予nNOS 特异性抑制剂7一I之后，吸气神经元的放电时程为0.1894士0.02475，平均频率为17.58士4.78HZ，和对照相比均显著性下降(P0 .05)，分别下降67.4%和30.8%:4)灌流给予上述三种试剂后，TE均未发生明显变化。结论1.NO对节律性呼吸中吸气活动的抑制作用参与了吸气中止机制;2.NO对呼吸强度和呼吸频率均有调节作用，但对前者的作用更为重要;3.在NO对基本节律性呼吸的调节过程中，主要由神经元合成并释放的内源性NO就可能满足其对节律性呼吸的调节功能的需要，而外源性NO，则可能由于对其需要量不大，或由于其半衰期过短，所以在呼吸调节中的作用不大;4.NO对mNRF中吸气神经元的放电时程和放电平均频率有明显的抑制作用，提示NO对吸气中止机制的影响，可能是通过对mN盯的吸气神经元的作用而实现的。
【学位授予单位】：中国人民解放军第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R338

【参考文献】