基于酵母聚糖A诱导的小鼠腹膜炎模型筛选具有抗炎活性的寡糖模拟肽

发布时间：2020-05-04 21:03

【摘要】：在诸多疾病如哮喘、心肌梗死等过程中,都存在急性炎症反应,对机体的损害较大。因此,寻找一种有效的抗炎方法,对于降低炎症反应造成的损害是十分重要的。炎症反应过程是选择素家族成员与其糖基化的配体相互作用的结果。选择素家族有三个成员,P(Platelet)-, E(Endothelium)-,L(Leukocyte)-选择素。其中,E-选择素在炎症部位的内皮细胞表达。E-选择素通过其C型凝集素结构域同白细胞糖脂和糖蛋白上的寡糖唾液酸化的路易斯X(sLeX)结合,介导白细胞(中性粒细胞,单核细胞和CD4+记忆细胞)在内皮细胞表面最初的滞留和滚动,以及随后迁移到炎症组织。因此,E-选择素及其糖基配体的拮抗物,能够抑制白细胞与内皮细胞发生粘附,起到抑制炎症的作用。 某些与特定寡糖空间构象类似的肽称为寡糖模拟肽。利用寡糖的单克隆抗体,从随机的肽文库中筛选出与之结合力较强的肽序列作为该寡糖的模拟肽。寡糖与其模拟肽两者在空间构象上的相似性决定了两者在功能上也存在着相似性,即寡糖模拟肽应能与寡糖的受体结合,阻碍寡糖与受体的相互作用。据此,在炎症过程中,若使用寡糖模拟肽作为抑制剂,可以阻断白细胞与内皮细胞的粘附及迁移,起到抑制炎症的作用。 本文目的是在由酵母聚糖A(Zymosan A)诱导小鼠产生的急性腹膜炎模型中筛选具有抗炎活性的寡糖模拟肽。 WP=5 炎症模型的建立是利用酵母聚糖A(Zymosan A)能够诱导产生炎症的作用,以一定浓度的Zymosan A溶液注射到小鼠腹腔,引起小鼠的急性腹膜炎。然后使用该模型筛选6种表达寡糖LewisA和LewisX模拟肽的噬菌体,结果表明6种表达模拟肽的噬菌体对小鼠腹腔中性粒细胞渗出有不同程度的抑制,实验组与对照组中性粒细胞计数的比较及中性粒细胞内酶标记物髓过氧化物酶(MPO)活性的测定都证实了该结果。其中4#(表达的肽结构为IELLQAR)与G19噬菌体的抗炎活性较强。为进一步证实模拟肽的抗炎作用,再应用这2种模拟肽的化学合成的肽,观察其对小鼠急性腹膜炎的抑制情况。 上述结果表明,Zymosan A作为化学刺激因子,诱导小鼠产生急性腹膜炎症,大量中性粒细胞渗出到腹腔。寡糖Lewis A或Lewis X的模拟肽,能在一定程度上抑制中性粒细胞的渗出,减轻炎症反应。这提示Zymosan A诱导血管内皮细胞表达E-选择素而引起中性粒细胞的渗出,而所筛选的寡糖Lewis A或Lewis X的模拟肽能够作为竞争性抑制剂与E-选择素结合,并阻断E-选择素与sLeX的作用,阻碍中性粒细胞与内皮细胞的粘附及渗出,减轻炎症反应引起的损伤,这为进一步研制和开发抗炎试剂提供了实验依据。
【图文】：

A B图 3 2#噬菌体对酵母聚糖诱导的小鼠腹膜炎的抑制（A：中性粒细胞计数 B：MPO 活性）中性粒细胞与 MPO 活性分别减少 26%与 25%，，结果见表 3表 3 2#噬菌体组的细胞计数与 MPO 活性变化实验组 对照组 抑制率 P例 数 （n） 13 13中性粒细胞（×106） 4.93±1.59 6.66±1.94 26% p<0.05（ x ±SD）MPO (IU) 0.12±0.03 0.16±0.03 25% p<0.01（ x ±SD）(2) 4#噬菌体组的细胞计数与 MPO 活性变化。（图 4）

图 3 2#噬菌体对酵母聚糖诱导的小鼠腹膜炎的抑制（A：中性粒细胞计数 B：MPO 活性）中性粒细胞与 MPO 活性分别减少 26%与 25%，结果见表 3表 3 2#噬菌体组的细胞计数与 MPO 活性变化实验组 对照组 抑制率 P例 数 （n） 13 13中性粒细胞（×106） 4.93±1.59 6.66±1.94 26% p<0.05（ x ±SD）MPO (IU) 0.12±0.03 0.16±0.03 25% p<0.01（ x ±SD）(2) 4#噬菌体组的细胞计数与 MPO 活性变化。（图 4）
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

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本文编号：2648990