大鼠慢性肉芽肿性炎模型的建立及其抗肿瘤性的初步研究

发布时间：2020-05-07 02:38

【摘要】：目的：为证明慢性肉芽肿性炎的抗肿瘤性，旨在摸索建立出在机体内持久保持的慢性肉芽肿性炎的动物模型，并对其抗肿瘤性进行了初步探讨研究。方法：进行动物实验制造模型，实验分两部分进行。 1.大鼠慢性肉芽肿性炎模型的建立研究中采用256只正常成年Wistar大鼠，雌雄各半。麻醉后，无菌操作在肝右叶膈面分别注射0.1ml药物。其中正常对照组大鼠36只，注射药物分别为C1、C4组：0.1mMPBS；C2、C5组：10㳠明胶(PBS配制)；C3、C6组：25㳠P407(PBS配制)。模型组220只，注射药物分别为M1、M6组：BCG原液；M2、M7组：BCG原液与10㳠明胶1∶1混合液；M3、M9组：2mlBCG原液与0.5g P407混合液；M4、M10组：破壁的灵芝孢子粉溶液(0.2g+1mlPBS)； M5、M11组：未破壁的灵芝孢子粉溶液(0.2g+2mlPBS)；M8组：前4周同M1组， 4周时以相同剂量在原部位加强一次。各模型组在肝内造模后，均以相同药物，相同剂量在右前肢皮下注射。术后4周，将C1、C2、C3和M1、M2、M3、M4、M5组大鼠脱颈处死；术后8周，将C4、C5、C6和M6、M7、M8、M9、M10、M11组大鼠脱颈处死。处死大鼠取肝右叶，观察肝右叶的形态学变化，重点取材结节形成部位及与周围肝组织交界处。同时取右前肢原注射部位的皮肤及皮下组 WP=4 织。取材组织常规石蜡切片，行HE染色与抗溶菌酶和CD20的免疫组织化学染色。 2.肉芽肿性炎抗肿瘤的初步观察取断奶Wistar雄性大鼠1只，体重50g，将Walker-256瘤株直接注入大鼠腹腔。一周后大鼠出现癌性腹水后，抽出癌性腹水。取体重150-200gWistar大鼠48只分成8组，每组大鼠右前肢皮下注射癌性腹水0.1ml造成皮下肿瘤模型。于造模后第3天分别在肿瘤内注射药物0.1ml，注射药物分别为T1、T5组：同M1组；T2、T6组：同M2组；T3、T7组：同M3组；T4、T8组：不给任何药物。造模后7天，将T1、T2、T3、T4组大鼠脱颈处死；造模后14天，将T5、T6、T7、T8组大鼠脱颈处死。处死的大鼠取新鲜胸腺组织，行胸腺细胞增殖和凋亡的FCM检测，并取皮下肿瘤常规制备石蜡切片行HE染色，光镜观察肿瘤内的形态变化。结果：在造模期间，大鼠体重正常增长，大鼠的行为、活动及食欲也无明显异常。 1.病理形态学观察各正常对照组肝内和皮下均无明显形态学改变，各模型组肝内和皮下均有结节形成。M1、M2、M3、M6、M7、M8和M9组形成的是结核样肉芽肿性炎，结节内可见到多少不等的上皮样细胞和Langhans巨细胞及炎细胞，并可见到少量干酪样坏死，结节周围伴有程度不等的纤维化。M4、M5、M10和M11组形成的异物肉芽肿性炎，且炎症内坏死多，范围大。就持久性而言，，不管是在肝内还是皮下，BCG结合P407刺激机体产生的慢性肉芽肿性炎8周后纤维化程度仍 WP=5 然较低，显示良好的持久性。 T1、T3组可见到肿瘤细胞坏死和炎细胞浸润。T5组仍可见到肿瘤细胞坏死及炎细胞，与T1组相比，肿瘤周围可见到纤维组织增生并包裹肿瘤。T7组与T3组相比，肿瘤边缘可见明显纤维化及多量炎细胞。 2.免疫组织化学染色各模型组溶菌酶染色均为阳性。M9组的阳性部位面积大于M3组，平均灰度无显著差异。阳性部位面积M2、M3、M4、M5组均大于M1组，M5组大于M4组，M9组大于M6及M7组，其余各组间无显著差异；而平均灰度除了M1组大于M2、M4组外，其余各组间均无显著差异。各模型组CD20染色均为阳性，各组之间的阳性率均无显著差异。 3.流式细胞定量检测 FCM检测造模后7天时，胸腺细胞凋亡率 T2组最高，T3组最低，T1组、T4组无显著差异，而增殖指数T1组最高，T3组次之，T2组、T4组之间无显著差异；造模后14天时，胸腺细胞凋亡率T6组最高，T7组最低，T5组高于T8组，而增殖指数T7组最高，T8组最低，T6组高于T5组。结论 1．各模型组均成功建立了慢性肉芽肿性炎模型。 2．在本研究所选各模型组中持久性最好的是BCG与P407结合组。 3．P407与细菌结合，不影响细菌的功能，是很好的缓释剂。 4．各组慢性肉芽中性炎模型中，B细胞的表达无明显差异。 5．BCG所致慢性肉芽肿性炎有抗肿瘤作用。 WP=6
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R-332

【参考文献】