分泌抗鼠疫杆菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立

发布时间：2020-05-07 01:42

【摘要】：目的：应用杂交瘤技术，制备分泌抗鼠疫杆菌F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，让其持续性产生F1单克隆抗体，为建立鼠疫的快速诊断方法提供抗体源。 方法：用鼠疫杆菌的特异成分F1抗原免疫6～8周龄、健康的雌性BALB／c小鼠，然后检测小鼠血清中的F1抗体效价，选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合，融合前三天用100μg F1抗原腹腔注射加强免疫一次，然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2／0骨髓瘤细胞混合后，50％的PEG作为细胞融合剂，，融合后的细胞用HAT培养液接种于96孔细胞培养板中进行选择培养，用间接ELISA法检测细胞培养上清液中的F1抗体，筛选出的F1抗体阳性杂交瘤细胞，用有限稀释法进行克隆，经过四次克隆化后获得了能稳定分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 结果：经过13次的细胞融合试验后，获得了三株能稳定分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为IV1B_(12)、IV2C_(10)和IV2C_6，用间接ELISA法检测其培养上清液中的F1单克隆抗体，F1抗体滴度分别为IV1B_(12) 1：1280～1：10240、IV2C_(10) 1：2560～1：10240和IV2C_6 1：5120～1：10240。 结论：应用杂交瘤技术，成功制备了三株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株，为进一步建立鼠疫快速诊断技术奠定了坚实的基础，同时也基本建立了杂交瘤技术的实验程序。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392.1

【参考文献】

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本文编号：2652216