肺炎链球菌感受态的形成与致病关系的研究

发布时间：2020-05-08 00:41

【摘要】： 感受态是细菌完成对外源DNA转化的重要且一过性生理过程，转化的结果是细菌摄取外来DNA后其遗传特征发生变化。肺炎链球菌(Streptococcus pneoumoniae,S.pn)是一种条件致病菌，其条件致病性可能与它在体内发生自然转化有关，但目前尚未见到研究这方面关系的相关报道。有报道当S.pn进入感受态后，可启动一些蛋白如自溶素的表达，而自溶素是S.pn的一种较重要的毒力因子，提示细菌的转化与毒力基因表达有一定关系。目的研究体外实验是否诱导S.pn的转化过程，探讨S.pn毒力因子的表达是否与环境诱导细菌感受态形成与转化过程有关。方法 1)用临床分离的肺炎链球菌诱导感受态的产生并制备感受态缺陷菌。操纵子comCDE为S.pn感受态唯一共同调控点，comE编码此操纵子的效应蛋白，用插入失活的方法使comE断裂来使整个comCDE操纵子失活，从而得到感受态缺陷菌。2)感受态缺陷菌与野生菌在诱导感受态的环境中培养，测定毒力因子的表达量。本实验分作两组，一组是 重庆医科火学硕士学位论文 实验组即感受态完整的野生菌在PH8．0的CTM中生长，另一组是感受态 缺陷菌PH8．0的CTM中生长，把PH6．8的CTM中生长的菌作为阴性对照。 分别在生长的不同时间点提取RNA，最后采用rea卜time RT—PCR来定量 测定各种毒力因子mRNA表达的水平。采用内标法排除操作误差，又同 时采用标准曲线法使结果精确定量。本实验所测的毒力因子有自溶酶、 溶血素、胆碱结合蛋白、S工gA、神经氨酸酶、透明质酸酶。另外还作了 comC的表达测定，从基因水平确定感受态的发生。 结果S．pn在自然 条件下转化时，培养后吸光度到0．08左右时加入DNA，在细菌OD㈣。为 0．54左右时，得到转化菌落。同时测得当细菌OD训。。在0．044到0．127 之间corn(：的表达最大，从细菌培养和基因表达水平两方面都表明这期间 感受态的形成，白溶酶、神经氨酸酶、透明质酸酶三种毒力因子的表达 也从这时开始迅速增高且随着培养时间的不同，表达在量上存在差异； 野生菌组表达明显高于缺陷菌组，成组设计资料两均数间比较的t检验 t值分别为2．96(P0．05)、2．8(P0．05)、4．56(P0．05)。 结论细菌 感受态能启动自溶酶、神经氨酸酶、透明质酸酶三种毒力因予mRNA的 表达，提示S．pn的感受态能促进其毒力因子的表达。
【图文】：

图216srRNA的电泳图外部标准标准曲线的制作表10标准品不同浓度所对应的萤光强度浓度(。g/。1)循环素10一34.4710一J8.5310一。15.5210’18.5410一820.02e孵lenumb.IOJ10闷10一气l。石一l。-图3外标用的标准曲线10一Epg/pl)
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R378.1

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本文编号：2653818